Tipos de muestras de sangre

CEEA Técnicas de obtención e inoculación de muestras

A. Técnicas de obtención de muestras


1. A Extracción de sangre de vena mandibular
2. A Extracción de sangre de seno retro-orbital
3. A Biopsia de cola
4. A Marcaje en orejas
5. A Perfusión in vivo








B. Técnicas de inoculación de muestras


1. BInoculación Subcutánea
2. B Inoculación Intraperitoneal
3. B Inoculación Intramuscular
4. B Inoculación Intradérmica
5. B Inoculación Intravenosa
6. B Inoculación en Almohadillas Plantares
















































Técnica nº1.A Extracción de sangre de Vena MandibularAnestesia: No requerida
Material: Aguja 19 – 21 G
Volumen de extracción: Consultar Tabla I


Descripción de la técnica:


1. Sujetar firmemente al ratón de manera que la cabeza quede alineada con el cuerpo, es decir, que no esté inclinada hacia el tórax o hacia los lados.
2. Comprimir ligeramente los vasos del cuello dellado opuesto al que se va a realizar la punción.
3. Localizar la pequeña zona circular desprovista de pelo situada centralmente en la mandíbula inferior (puede no estar presente en algunas cepas).
4. Con una aguja de 19-21 G, dependiendo de la edad y/o tamaño del ratón, realizar la punción (inclinando dorsalmente la aguja 1-2 mm) en la zona anteriormentedescrita. La profundidad óptima es de 2-3 mm.
5. Recoger la sangre en el recipiente adecuado teniendo en cuenta que el flujo será de aproximadamente una gota (20μl) por segundo.
6. Una vez obtenida la muestra liberar al ratón. El sangrado se detendrá automáticamente.



http://www.univ.trieste.it/~servpoli/stabpst.m1v

Técnica nº2.A Extracciónde sangre de Seno Retro-orbital


Anestesia: Obligatoria
Material: Capilares tratados con anticoagulante (EDTA, heparina…)
Restricciones: Esta técnica debe ser llevada a cabo únicamente cuando no exista método alternativo y siempre por personal cualificado debido al elevado riesgo de dañar estructuras adyacentes al globo ocular, lo que puede originarinfecciones severas, ceguera etc…
Volumen de extracción: Consultar Tabla I

Descripción de la técnica:

1. Una vez anestesiado el ratón y comprobado que se ha alcanzado el plano quirúrgico, sujetar al ratón estirando la piel del cuello hacia atrás asegurándose de no dificultar la respiración
2. Insertar el capilar en el ánguloexterno del ojo (2 mm aprox) y girar suavemente hasta que la sangre fluya por el mismo.
3. Recoger la muestra y retirar el capilar.
4. Oprimir ligeramente la zona de punción con una gasa o papel para detener la hemorragia.
5. Aplicar pomada oftálmica (Lubrifilm) al ojo.
6. Comprobar que la recuperación de la anestesia seproduce adecuadamente aportando las medidas que se consideren necesarias para ello (i.e , aporte de calor )
7. Observar al animal los días posteriores al sangrado para detectar la aparición de posibles complicaciones: protrusión de tejido adyacente al ojo, infecciones, hemorragias…



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Fig. 1

Técnica nº 3. A Biopsia de cola

Anestesia: En función de la edad ysección de cola que se quiera obtener.
Material: Escalpelo, tijeras o cauterizador eléctrico.
Longitud máxima de la muestra: 5 mm

Requerimientos:


1. La longitud máxima a cortar es de 5 mm. De este fragmento se obtienen unos 50 μg de DNA, suficiente para múltiples ensayos de genotipado. Muestras mayores a 5 mm requerirán autorización expresa del Comité Ético del centro....