titulacion de aminoacidos

LABORATORIO #4 “AMINOACIDOS: CURVAS DE TITULACION Y SEPARACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA”



SMERLLY GELITZA LOPEZ
NICOLAS SAZA COAJI
SEBASTIAN AGUDELO
CARLOS GUEVARA




DOC. JORGUE RAMIREZ



UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS ORIENTALES
F.C.A.R.N
BIOQUIMICA
2014

OBJETIVOS
Comprobar el carácter anfotérico de los aminoácidos y determinar mediante curvas de titulación, losvalores pK de los grupos ionizables.
Hallar el punto isoeléctrico de los aminoácidos
Separar e identificar una mezcla de aminoácidos por cromatografía en capa fina.

RESULTADOS
5.1 Titulación de un aminoácido
Al realizar el procedimiento de titulación de la glicina obtuvimos una curva de la siguiente forma:
GRAFICA#1”CURVA TITULACION GLICINA”


5.2 Separación cromatografía de aminoácidosDistancia recorrida por cada muestra

Triptófano

Glicina mas tirosina

Muestra desconocida
20 mm
18 mm
20 mm
5 mm
12 mm
22 mm


Rf: Factor de retención
Rf: Distancia desde el punto de siembra hasta el lugar donde aparece la mancha de color (A)
Distancia desde el punto de siembra hasta el frente de elución del liquido

Triptófano

Rf: ______20 mm_________ = 0.3655 mm

Glicina mas tirosina

Rf(a): ____18 mm______ = 0.32
55 mm

Rf(b): ____20 mm______ = 0.36
55 mm

Muestra desconocida

Rf(a): _______5 mm_____ = 0.09
55 mm

Rf(b): ______12 mm_____ = 0.21
55 mm

Rf(c): ______22 mm_____ = 0.455 mm

Distancia recorrida por cada una de las muestras y cálculo del Rf
Muestra
Distancia recorrida (mm)
Rf
Triptofano
20 mm
0.36
Glicina mas tirosina


18 mm

20 mm
0.32

0.36
Muestra desconocida

5 mm

12 mm

22 mm

0.09

0.21

0.4




Análisis de resultados
5.2 Separación cromatografía de aminoácidos
La formación de color se tomacomo resultado positivo e indica su presencia, mientras que el no desarrollo de color es indicativo de que no está presente. En las tres placas hubo muestras de color por lo que se verifica que la muestra desconocida también es un aminoácido.
La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen de la placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante paracada compuesto en unas condiciones cromatográficas determinadas (adsorbente, disolvente, tamaño de la cubeta, temperatura, etc.)
La retención se puede explicar en base a la competencia que se establece entre el soluto a separar y la fase móvil por adsorberse a los centros activos polares de la fase estacionaria. La retención y la selectividad en la separación dependen de los valores respectivos delas constantes de los diferentes equilibrios químicos que tienen lugar, que están en función de:
- la polaridad del compuesto, determinada por el número y naturaleza de los grupos funcionales presentes. Los solutos más polares quedarán más retenidos puesto que se adsorben más firmemente a los centros activos de la fase estacionaria, mientras que los no polares se eluirán con mayor facilidad.Según lo anterior y los resultados del laboratorio, el triptófano sería un aminoácido apolar puesto que la placa muestra una elución extendida de alrededor de 20 mm y la mancha se observa lejos de la fase estacionaria. Lo cual es teóricamente cierto debido a que el triptófano se considera un aminoácido apolar o hidrófobo.
La mezcla de la glicina y tirosina mostró en la placa dos manchas redondasrepresentativas, además de que hubo muestra de color por aproximadamente 20 mm de la placa lo cual nos puede indicar la presencia de un aminoácido polar que se manifestó de forma leve cerca a la fase estacionaria y la presencia de un aminoácido apolar teniendo en cuenta la mancha redonda a 20 mm de la línea base o fase estacionaria. Teóricamente la glicina es un aminoácido apolar y la tirosina...