Transformacion, Purificacion Y Sds Page
Páginas: 12 (2880 palabras)
Publicado: 25 de octubre de 2012
Jaymarie Rolón González
Y00345204
BIOL 4605 Lab. Destrezas III
Prof. Yarira Ortiz-Alvarado
UNIVERSIDAD INTERAMERICANA DE PUERTO RICO
RECINTO DE BAYAMON
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMATICAS
INFORME: Transformación de pGLO, Purificación de plasmidio y SDS PAGE
PROPÓSITOS:
Transformación de pGLO
- Realizar una trasformación bacterial con E. Coli en medio LB.
-Insertar en las bacterias una proteina fluorecente de color verde (GFP).
Purificación de plasmidio
- Observar y calcular la eficiencia de transformación.
- Lisar las bacterias
- Realizar una cromatografía de columna para cada muestra.
SDS PAGE
- Preparar, montar los cristales y cargar las muestras para realizar electroforesis.
- Teñir la gelatina e interpretar los datos.
INTRODUCCIÓN:En qué consiste el método de transformación y cuál es su propósito
La transformación es un proceso por el cual las células captan DNA libre presente en el medio. Es un fenómeno que ocurre de forma natural en muchas
bacterias, pero la eficacia del proceso varía enormemente de unas especies a otras. Para que la transformación tenga lugar, la bacteria tiene que encontrarse en el llamadoestado de competencia, que ocurre en determinadas condiciones
fisiológicas; en este estado, la bacteria presenta alteraciones en su pared y membrana celulares, que permiten la entrada de ácidos nucleicos en la célula.
En el laboratorio se ha conseguido poner a punto técnicas que inducen el estado de competencia en bacterias que no lo presentan de forma natural,
como es el caso de E. coli. Estastécnicas se basan en diversos tratamientos
químicos o físicos que producen microporos en la célula, lo que permite la introducción del DNA exógeno (transformación) de modo bastante eficiente.
Uno de los métodos físicos es la electroporación, consistente en inducir la competencia mediante la aplicación de un pulso eléctrico muy breve e intenso. Dicha competencia se puede inducir contratamientos químicos utilizando compuestos como el cloruro cálcico. Hay que tener en cuenta sin embargo que tras estos tratamientos no todas las células del cultivo se hacen competentes.
La transformación en el laboratorio es una técnica rutinaria de enorme utilidad, que nos permite introducir prácticamente cualquier plásmido en su
forma circular o superenrollada en casi cualquier tipo de bacteria. Elmétodo que se describe a continuación es, por su simplicidad, uno de los más utilizados para transformar E. coli. Para detectar la transformación, el DNA introducido llevará un marcador seleccionable en el medio adecuado.
El objetivo de esta práctica es introducir el plásmido recombinante obtenido en una reacción de ligación en la estirpe de Escherichia coli DH5α. Esta estirpe está modificadagenéticamente de manera que es posible inducir en laboratorio la competencia de las células así como mantener el plásmido de forma estable en su interior.
En qué consiste el método de lisis alcalina y cuál es su propósito
El ADN genómico puede obtener se a partir de cualquier microorganismo, planta o animal encualquier instante durante su desarrollo, y nos provee de copias moleculares degenes de cadaorganismo. Este material puede entonces ser utilizado para la construcción de bibliotecas, en análisisde hibridación, como molde en reacciones de amplificación y secuenciamiento, entre otrasaplicaciones.
Los métodos de aislamiento de ácidos nucleícos, sin importar de que tipo o procedencia, siguen siempre cuatro etapas fundamentales: lisis de células, inhibición de nucleasas,desproteinización y precipitación de ácidos nucleídos. La diferencia entre cada método radica en el pre- tratamiento, lo cual dependerá del origen del material; además deberá tenerse en cuenta de que el método de purificación tiene que ser perfectamente compatible con el uso futuro que se piensa dar al ADN o ARN purificado.
El ADN puede aislarse mediante ruptura de tejidos, y luego explotando las...
Y00345204
BIOL 4605 Lab. Destrezas III
Prof. Yarira Ortiz-Alvarado
UNIVERSIDAD INTERAMERICANA DE PUERTO RICO
RECINTO DE BAYAMON
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMATICAS
INFORME: Transformación de pGLO, Purificación de plasmidio y SDS PAGE
PROPÓSITOS:
Transformación de pGLO
- Realizar una trasformación bacterial con E. Coli en medio LB.
-Insertar en las bacterias una proteina fluorecente de color verde (GFP).
Purificación de plasmidio
- Observar y calcular la eficiencia de transformación.
- Lisar las bacterias
- Realizar una cromatografía de columna para cada muestra.
SDS PAGE
- Preparar, montar los cristales y cargar las muestras para realizar electroforesis.
- Teñir la gelatina e interpretar los datos.
INTRODUCCIÓN:En qué consiste el método de transformación y cuál es su propósito
La transformación es un proceso por el cual las células captan DNA libre presente en el medio. Es un fenómeno que ocurre de forma natural en muchas
bacterias, pero la eficacia del proceso varía enormemente de unas especies a otras. Para que la transformación tenga lugar, la bacteria tiene que encontrarse en el llamadoestado de competencia, que ocurre en determinadas condiciones
fisiológicas; en este estado, la bacteria presenta alteraciones en su pared y membrana celulares, que permiten la entrada de ácidos nucleicos en la célula.
En el laboratorio se ha conseguido poner a punto técnicas que inducen el estado de competencia en bacterias que no lo presentan de forma natural,
como es el caso de E. coli. Estastécnicas se basan en diversos tratamientos
químicos o físicos que producen microporos en la célula, lo que permite la introducción del DNA exógeno (transformación) de modo bastante eficiente.
Uno de los métodos físicos es la electroporación, consistente en inducir la competencia mediante la aplicación de un pulso eléctrico muy breve e intenso. Dicha competencia se puede inducir contratamientos químicos utilizando compuestos como el cloruro cálcico. Hay que tener en cuenta sin embargo que tras estos tratamientos no todas las células del cultivo se hacen competentes.
La transformación en el laboratorio es una técnica rutinaria de enorme utilidad, que nos permite introducir prácticamente cualquier plásmido en su
forma circular o superenrollada en casi cualquier tipo de bacteria. Elmétodo que se describe a continuación es, por su simplicidad, uno de los más utilizados para transformar E. coli. Para detectar la transformación, el DNA introducido llevará un marcador seleccionable en el medio adecuado.
El objetivo de esta práctica es introducir el plásmido recombinante obtenido en una reacción de ligación en la estirpe de Escherichia coli DH5α. Esta estirpe está modificadagenéticamente de manera que es posible inducir en laboratorio la competencia de las células así como mantener el plásmido de forma estable en su interior.
En qué consiste el método de lisis alcalina y cuál es su propósito
El ADN genómico puede obtener se a partir de cualquier microorganismo, planta o animal encualquier instante durante su desarrollo, y nos provee de copias moleculares degenes de cadaorganismo. Este material puede entonces ser utilizado para la construcción de bibliotecas, en análisisde hibridación, como molde en reacciones de amplificación y secuenciamiento, entre otrasaplicaciones.
Los métodos de aislamiento de ácidos nucleícos, sin importar de que tipo o procedencia, siguen siempre cuatro etapas fundamentales: lisis de células, inhibición de nucleasas,desproteinización y precipitación de ácidos nucleídos. La diferencia entre cada método radica en el pre- tratamiento, lo cual dependerá del origen del material; además deberá tenerse en cuenta de que el método de purificación tiene que ser perfectamente compatible con el uso futuro que se piensa dar al ADN o ARN purificado.
El ADN puede aislarse mediante ruptura de tejidos, y luego explotando las...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.