Trichoderma harzianum

viii EFECTO DE ENZIMAS LÍTICAS PRODUCIDAS POR Trichoderma harzianum CINV17 DURANTE EL MICOPARASITISMO SOBRE HONGOS FITOPATÓGENOS por:

Daniela Livas Lara

Tesis propuesta a la

Unidad de Investigación y Desarrollo en Alimentos del

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE VERACRUZ como requerimiento parcial para obtener el grado de

Maestro en Ciencias

en Ingeniería Bioquímica

4 de Septiembredel 2007

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CONTENIDO

RESUMEN……………………………………………………………………………………….. ABSTRACT……………………………………………………………………………………… LISTA DE TABLAS…………………………………………………………………………….. LISTA DE FIGURAS……………………………………………………………………………. LISTA DE SIMBOLOS…………………………………………………………………………. 1. INTRODUCCIÓN……………………………………………………………..……………… 2. GENERALIDADES…………………………………………………………..…………….... 2.1. CONTROLBIOLÓGICO……………………………………………………...………. 2.2. CARACTERÍSTICAS DE Trichoderma spp.......................................................... 2.2.1. MORFOLOGÍA DE Trichoderma harzianum…………………………………. 2.3. Trichoderma harzianum COMO AGENTE DE BIOCONTROL............................. 2.3.1. CONTROL BIOLÓGICO DE FITOPATÓGENOS........................................ 2.3.1.1. CONTROL DE HONGOS RADICULARES................................... 2.3.1.2.CONTROL DE HONGOS AÉREOS……………………………….. 2.3.1.3. CONTROL DE HONGOS EN POSCOSECHA…………………… 2.4..PRODUCTOS DE Trichoderma harzianum PARA LA AGRICULTURA………… 2.4.1. SITUACIÓN MUNDIAL DEL MERCADO DE LOS BIOPLAGUICIDAS... 2.5. COMPARACIÓN DEL CONTROL QUÍMICO Y EL CONTROL BIOLÓGICO…... 2.6. ACTIVIDAD ANTAGONISTA DE Trichoderma harzianum……….………………. 2.6.1. PRODUCCIÓN DE ANTIBIÓTICOS…………………………...……………... 2.6.2.COMPETITIVIDAD POR NUTRIENTES……………………………………… 2.6.3. INDUCCIÓN DE LA RESISTENCIA DE PLANTAS…………………………. 2.6.4. MICOPARASITISMO…………………………………………………………… 2.7. ENZIMAS LÍTICAS PRODUCIDAS POR Trichoderma harzianum DURANTE EL MICOPARASITISMO…………………………………………………………….. 2.7.1. ENZIMAS β-1,3-GLUCANOLÍTICAS…………………………………………. 2.7.2. ENZIMAS QUITINOLÍTICAS…………………………………………………... 2.7.3. ENZIMASPROTEOLÍTICAS………………………………………………….. 2.7.4. XILANASAS Y OTRAS ENZIMAS HIDROLÍTICAS…………………………. 2.8. ESTRUCTURA DE LA PARED CELULAR DE LOS HONGOS…………………..

IV VI XI XII XIV 1 3 3 4 5 6 6 8 8 9 9 12 12 14 14 15 15 17 19 19 21 24 24 25

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2.8.1. COMPOSICIÓN DE LA PARED CELULAR DE LOS HONGOS…………... 3. ANTECEDENTES..…………………………………………………………..…………….... 4. JUSTIFICACIÓN…………………………..……………………………...…………………. 5.OBJETIVOS………………………………..……………………………...…………………. 5.1. OBJETIVO GENERAL……………….………………..……....……………………... 5.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS……....……………...….………..……………............. 6. MATERIALES Y METODOS………………….…………………..……………................. 6.1. METODOLOGÍA GENERAL…………………………………………………………. 6.2. MICROORGANISMOS Y MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS.………………... 6.2.1. CEPAS…………………………………………………………………………… 6.2.2. PAPA- DEXTROSA- AGAR………….………………………………………… 6.2.3. CONSERVACIÓN DECEPAS……………….….………….…………........... 6.3. PROPAGACIÓN DE LAS CEPAS…………..….…………………………………… 6.3.1. Trichoderma harzianum………………………………………………………… 6.3.2. HONGOS FITOPATÓGENOS………………………………………………… 6.4. DETERMINACIONES ANALÍTICAS………………………………………………… 6.4.1. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD β-1,3-GLUCANOLÍTICA…………. 6.4.2. DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD XILANOLÍTICA………………………... 6.4.3. DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD QUITINOLÍTICA………………………. 6.4.4. DETERMINACIÓN DE ACTIVIDADPROTEOLÍTICA (MÉTODO DE KUNITZ).……………………………………………………………………..... 6.4.5. CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNA POR EL MÉTODO DE BRADFORD... 6.7. PREPARACIÓN DE PRUEBAS DE INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO DE HONGOS FITOPATÓGENOS EN PLACAS DE AGAR CON EXTRACTO CRUDO DE FRACCIONES (PDA-FRACCIÓN)……………………….…………. 6.8. ANÁLISIS ESTADÍSTICO………….…………………………………………………. 7. RESULTADOS Y DISCUSIÓN………………………….………………………………….. 7.1.FRACCIONAMIENTO POR ISOELECTROENFOQUE (IEF) PREPARATIVO… 7.1.1. PERFIL ENZIMÁTICO β-1,3-GLUCANOLÍTICO Y QUITINOLÍTICO DE LAS FRACCIONES DEL ISOELECTROENFOQUE (IEF)..…................... 7.1.2. PERFIL ENZIMÁTICO XILANOLÍTICO Y PROTEOLÍTICO DE LAS FRACCIONES DEL ISOELECTROENFOQUE...