técnicas de laboratorio

PRACTICA #6
MICROSCOPIO
COMPUESTO
(FROTIS BACTERIANO DE MUCOSA
NASAL)

“TÉCNICA DE GRAM”
El imperceptible tamaño de las bacterias y otros
microorganismos así como la dificultad para obsérvalas en
detalle con el microscopio óptico ;hizo que se crearan
métodos para poder apreciarlas ,siendo los métodos mas
sencillos de fijación y tinción ,iniciados por Paul Ehrlinch y
Robert Koch, los quepermitieron a los microbiólogos
distinguir muchas características estructurales normalmente
vistas , así el uso de colorantes es el medio mas simple de
aumentar el contraste .
La tinción de GRAM es uno de los métodos de tinción mas
importantes en el laboratorio de microbiología .Su aplicación
práctica es innegable sobre todo en el trabajo microscópico
de rutina; las referencias a la morfología celularbacteriana
(cocos , bacilos , espirilos ; negativos y positivos).se
basan precisamente en la tinción de GRAM.

Esta técnica de coloración de contraste fue descubierta por HANS
CHRISTIAN GRAM en 1884.Es de considerarse que la reacción de
GRAM no es infalible ni constante ; puede variar con el tipo de
cultivo y el PH del medio y quizás por otras causas.
La capacidad de las células para captar lacoloración de GRAM es
aplicable de manera adecuada en bacterias ; como puede
advertirse en las células animales y vegetales superiores , que no
conservan uno de los colorantes de los que esta compuesto la
técnica ; los hongos microscópicos se tiñen de cierta
irregularidad :los gránulos de micelios tienden a retener el
colorante.
El fundamento de la técnica se hace con base en las diferencias
entra
lascelular
paredesde
celulares
de lasGRAM
bacterias
GRAM
positivas
y
La pared
las bacterias
positivas
,posee
una
GRAM
gruesa negativas.
capa de peptidoglicano.Por el contrarío ,la capa de
peptidoglicano de la bacterias GRAM negativas es delgada ,y
se encuentra unida a una segunda membrana exterior está
hecha por proteína , fosfolipido, y lipolisacarido (que es
encuentra en la cara externa de lamembrana externa de este
tipo de bacterias).

Bacterias GRAM positivas y bacterias GRAM
negativas

A partir de la tinción de GRAM pueden distinguirse varias formas
distintas :
-Los cocos: de forma esférica , pueden presentarse aislados después
de la división celular (Micrococos), por paredes (Diplococos) ,formar
cadenas (Estreptococos) , ó agruparse de forma irregular
(Estafilococos).
-Los bacilos:poseen forma alargada . En general suelen agruparse en
forma de cadena (Estreptobacilos) , o en empalizada.
-También pueden distinguirse los espirales , clasificados en espirilos si
son de forma rígida o espiroquetas si son blandas y onduladas , si
poseen forma como curvados ,entonces se llama vibriones.

“PRÁCTICA
”

Materiales  
Mechero Bunsen o de Alcohol   
Asa de Siembra o aguja enmangada Pinzas 
Portaobjetos 
Muestras bacterianas de origen natural: Yogur, Sarro Dental,
Suelo, etc. 
Palillos 
Microscopios 
Aceite de inmersión  
Soporte de Tinciones 
Goteros 
Pinzas 
Agua destilada 
Colorantes para Tinción: Solución de cristal Violeta Lugol
Safranina  Etanol 95%  

Procedimiento 
I. prepara las muestras siguiendo estos pasos: 
1. En unas gotas de agua colocadas sobre unportaobjetos, disuelve
una pequeña cantidad de yogur con ayuda de un palillo higiénico. Haz
lo mismo con la muestra de sarro dental extraído de la boca de
alguien.2. Prepara una fina extensión (frotis), en otros portas,
dejándolos secar.3. Fija este frotis dándole varios pases a los portas
sobre la llama del mechero, con la muestra hacia arriba. 
II Tiñe ahora los frotis fijados mediante los siguientespasos:
1. Cubre ambos frotis con cristal violeta durante 3 min. Se retirará el
colorante mediante un suave lavado con agua, deslizando el agua
sobre el porta, para non desprender la muestra. Se 2. cubrir ahora con
Lugol durante 1 min., y después se realizará otro lavado suave. Todas
las células se teñirán de violeta.2. Se retirará el colorante con etanol,
goteándolo por el portaobjetos, hasta que las...