Aislamiento de DNA Plasmidico
Páginas: 9 (2093 palabras)
Publicado: 13 de septiembre de 2013
AISLAMIENTO DE DNA PLASMÍDICO.
Introducción
Para entender los actuales adelantos en la Biología Molecular de la Célula, es necesario familiarizarse con el entorno experimental y los métodos de análisis moleculares (Darnell et al., 1988). La era de oro de la Biología Molecular se estableció una vez que fue posible aislar segmentos específicos de DNA que representaban genes individuales. Alprincipio solo se podía obtener una acumulación de DNA de un organismo y recién a mediados de la década de 1970 se desarrollaron métodos capaces de aislar genes específicos (Watson y Baker, 2008).
Tales métodos involucran concretamente a la electroforesis en gel de poliacrilamida, en la cual fue posible detectar la longitud y la pureza exacta de ciertas moléculas (Alberts et al., 1996) como es elcaso de los ácidos nucleicos; ya que sus movilidades electroforéticas en esos geles varían en proporción inversa a sus masas moleculares. Sin embargo, los DNA de más de unos pocos miles de pares de bases son muy grandes para penetrar los geles de poliacrilamida (Voet y Voet, 2006). Y también debido a que cada nucleótido presenta una única carga negativa, no es necesario utilizar el detergentecargado negativamente SDS que se requiere para conseguir que las moléculas de proteína se muevan de una manera uniforme hacia el electrodo positivo (Alberts et al., 1996). Esta dificultad se soluciona en parte por el uso de geles de agarosa. Los geles con bajo contenido de agarosa permiten el fraccionamiento de moléculas de DNA relativamente grandes en distintos rangos de tamaño (Voet y Voet, 2006).
Lapreparación y el purificado de una muestra de DNA recombinante forma parte de la primera etapa de todo proceso de manipulación genética e inmediatamente después se incorpora este DNA al interior de células receptoras de una población bacteriana (Jiménez-Sánchez y Guerrero, 1982). En esta población se selecciona posteriormente aquellos clones que expresen la información genética que se hayaincorporado. El término clonación se refiere en general a la producción de copias idénticas de una entidad individual de manera asexual. Al introducir una copia de un fragmento de DNA de eucarionte en una célula receptora, se replicará de manera autónoma en relación con el cromosoma del huésped. El DNA del eucarionte debe encontrarse enlazado en forma covalente con el DNA de un vector que normalmente sereplica en un medio ambiente bacteriano. Los tipos de vectores que se usan con más frecuencia en los procedimientos de clonación son los plásmidos bacterianos (Karp, 1987). Estas son moléculas circulares de DNA de doble cadena que se encuentran naturalmente en varias especies de bacterias y son de característica extracromosomal, es decir, se replican de manera independiente del cromosomabacteriano (Watson y Baker, 2008).
Estos avances técnicos han traído el descubrimiento de enzimas que cortan el DNA de cualquier organismo en secuencias de nucleótidos cortas y específicas, de modo que generan un conjunto reproducible de fragmentos. En consecuencia, la disponibilidad de estas enzimas facilitó enormemente el desarrollo de otras dos técnicas importantes, la clonación y la secuenciacióndel DNA. Mediante la utilización de técnicas enzimáticas y microbiológicas avanzadas, se pueden insertar fragmentos de cualquier DNA en el DNA de un bacteriófago u otro vector para producir DNA recombinante (Darnell et al., 1988).
Objetivos
Analizar las características fisicoquímicas en las que se basa la extracción de DNA plasmídico presente en una célula procarionte.
Analizarfundamentos fisicoquímicos y los parámetros que se evalúan en la electroforesis de DNA en gel de agarosa.
Hipótesis
Al realizar una extracción de DNA plasmídico de un cultivo de Escherichia coli utilizando NaoH/SDS, etanol, acetato de potasio y buffer TE; entonces será posible identificar las características fisicoquímicas en las que se basa dicha extracción.
Al realizar una electroforesis...
Introducción
Para entender los actuales adelantos en la Biología Molecular de la Célula, es necesario familiarizarse con el entorno experimental y los métodos de análisis moleculares (Darnell et al., 1988). La era de oro de la Biología Molecular se estableció una vez que fue posible aislar segmentos específicos de DNA que representaban genes individuales. Alprincipio solo se podía obtener una acumulación de DNA de un organismo y recién a mediados de la década de 1970 se desarrollaron métodos capaces de aislar genes específicos (Watson y Baker, 2008).
Tales métodos involucran concretamente a la electroforesis en gel de poliacrilamida, en la cual fue posible detectar la longitud y la pureza exacta de ciertas moléculas (Alberts et al., 1996) como es elcaso de los ácidos nucleicos; ya que sus movilidades electroforéticas en esos geles varían en proporción inversa a sus masas moleculares. Sin embargo, los DNA de más de unos pocos miles de pares de bases son muy grandes para penetrar los geles de poliacrilamida (Voet y Voet, 2006). Y también debido a que cada nucleótido presenta una única carga negativa, no es necesario utilizar el detergentecargado negativamente SDS que se requiere para conseguir que las moléculas de proteína se muevan de una manera uniforme hacia el electrodo positivo (Alberts et al., 1996). Esta dificultad se soluciona en parte por el uso de geles de agarosa. Los geles con bajo contenido de agarosa permiten el fraccionamiento de moléculas de DNA relativamente grandes en distintos rangos de tamaño (Voet y Voet, 2006).
Lapreparación y el purificado de una muestra de DNA recombinante forma parte de la primera etapa de todo proceso de manipulación genética e inmediatamente después se incorpora este DNA al interior de células receptoras de una población bacteriana (Jiménez-Sánchez y Guerrero, 1982). En esta población se selecciona posteriormente aquellos clones que expresen la información genética que se hayaincorporado. El término clonación se refiere en general a la producción de copias idénticas de una entidad individual de manera asexual. Al introducir una copia de un fragmento de DNA de eucarionte en una célula receptora, se replicará de manera autónoma en relación con el cromosoma del huésped. El DNA del eucarionte debe encontrarse enlazado en forma covalente con el DNA de un vector que normalmente sereplica en un medio ambiente bacteriano. Los tipos de vectores que se usan con más frecuencia en los procedimientos de clonación son los plásmidos bacterianos (Karp, 1987). Estas son moléculas circulares de DNA de doble cadena que se encuentran naturalmente en varias especies de bacterias y son de característica extracromosomal, es decir, se replican de manera independiente del cromosomabacteriano (Watson y Baker, 2008).
Estos avances técnicos han traído el descubrimiento de enzimas que cortan el DNA de cualquier organismo en secuencias de nucleótidos cortas y específicas, de modo que generan un conjunto reproducible de fragmentos. En consecuencia, la disponibilidad de estas enzimas facilitó enormemente el desarrollo de otras dos técnicas importantes, la clonación y la secuenciacióndel DNA. Mediante la utilización de técnicas enzimáticas y microbiológicas avanzadas, se pueden insertar fragmentos de cualquier DNA en el DNA de un bacteriófago u otro vector para producir DNA recombinante (Darnell et al., 1988).
Objetivos
Analizar las características fisicoquímicas en las que se basa la extracción de DNA plasmídico presente en una célula procarionte.
Analizarfundamentos fisicoquímicos y los parámetros que se evalúan en la electroforesis de DNA en gel de agarosa.
Hipótesis
Al realizar una extracción de DNA plasmídico de un cultivo de Escherichia coli utilizando NaoH/SDS, etanol, acetato de potasio y buffer TE; entonces será posible identificar las características fisicoquímicas en las que se basa dicha extracción.
Al realizar una electroforesis...
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