Reaccion En Cadena De La Polimerasa

PCR
(Reacción en cadena de la polimerasa)

Presentado por:
José De La Rosa
Cristian Felipe Ramírez

Asignatura: Bioquímica Medica II



Grupo: BMO42-5

Instituto Tecnológico Metropolitano

Año: 2012

CONTENIDO

I. Reacción En Cadena De LaPolimerasa

a. ¿Qué es la Reacción en Cadena de la Polimerasa?
b. ¿Cómo se hace la reacción en cadena de la polimerasa?

- Solución amortiguadora
- Magnesio
- Desoxirribonucleósidostrifosfatados (dNTPs)
- Enzima
- ADN
-Agua
- Etapas de un ciclo de reacción
- Desnaturalización
- Alineamiento
- Extensión
- Naturaleza exponencial de los ciclos

II. Aplicaciones de la PCR

III. Ventajas y Desventajas del PCR

a. Ventajas
b. Desventajas

IV. Aplicaciones en la medicinaV. Bibliografía

I.REACCIÓN EN CAENA DE LA POLIMERASA
La biología molecular ha sido una disciplina muy afortunada, ya que ha presentado muchos avances en tiempos relativamente cortos.
Uno de estos saltos tecnológicos fue la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR); desarrollada por KaryMullis en 1983, quien consiguió crear una técnica que hizo posible lograr sintetizar grandescantidades de un fragmento de ADN sin tener que clonarlo; mediante la PCR ( PolymeraseChainReaction ).Con ésta se consigue copiar millones de veces, en un par de horas, una secuencia predeterminada, dentro de una mezcla de ADN tan compleja como el propio genoma humano, donde la secuencia de interés representa tan solo una diezmillonésima parte.
Para practicar la PCR basta con utilizar una sola moléculade ADN, por ejemplo del genoma humano aunque habitualmente se emplean cantidades excesivas de éste (en el orden de microgramos). Es común emplear productos biológicos diversos como tejidos en bebidos en parafina, semen recuperado de escenas de violación, lavados bronquiales, exudados de mucosas, raíces de cabellos o cejas, sangre, extendidos citológicos, etc.; muchas veces basta una simpleebullición de la muestra para lisar, liberar y de paso desnaturalizar el ADN, dejándolo listo para la reacción.
¿Qué es la Reacción en Cadena de la Polimerasa?
La PCR es un método in vitro de síntesis de ADN con el que un segmento particular de éste es específicamente amplificado al ser delimitado por un par de cebadores o iniciadores que lo flanquean. Su copiado se logra en forma exponencial a través derepetidos ciclos de diferentes periodos y temperaturas de incubación en presencia de una enzima ADN polimerasa termoestable. Así se obtiene en cuestión de horas, millones de copias de la secuencia deseada del ADN.

La PCR es una técnica de biología molecular altamente específica, rápida, sensible y versátil para detectar cantidades ínfimas de un cierto ADN específico, posibilitando su fácilidentificación y prescindiendo del uso de radioisótopos, indispensables antes de su invención.

Los inconvenientes que tuvo su inventor al principio fueron:
-La desactivación de la ADN polimerasa, al ser sometido el conjunto a altas temperaturas, las cuales son necesarias para desnaturalizar el ADN y exponer las bases nitrogenadas de sus nucleótidos.

-Otro inconveniente era que había quehacerlo manualmente en tres baños mantenidos a las diferentes temperaturas requeridas, pasando rápidamente la muestra de un baño al otro y luego retornándolo, de tal manera que se repitiera este proceso varias decenas de veces.

La solución al inconveniente principal fue el descubrimiento de una bacteria llamada ThermusAquaticus. Estos microorganismos viven en aguas termales y geissers a (75°C),...