actividad enzimatica

Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

Facultad de Ciencias Químicas
Departamento de Bioquímica Alimentos


REPORTE DE PRACTICA No. 3 “PUNTO ISOELÉCTRICO DE PROTEÍNAS”


Alumnos:
Tania Elizabeth Camarillo Serrano
Jeniffer Alexis Estanislao Sierra
Diana Gámez González
Oswaldo Zagal Ramos

Asignatura:
Bioquímica I

Docente:
M.C. Eustoquia Ramos Ramírez

Carrera:
Lic.Químico Farmacobiólogo

18 de Septiembre de 2012; Puebla, Puebla.





























TEORIA


Todas las macromoléculas de la naturaleza adquieren una carga cuando se dispersan en agua. Una característica de las proteínas y otros biopolímeros es que la carga total que adquieren depende del pH del medio.
Así, todas las proteínas tienen una carga netadependiendo del pH del medio en el que se encuentren y de los aminoácidos que la componen, así como de las cargas de cualquier ligando que se encuentre unido a la proteína de forma covalente (irreversible).
Debido a la composición en aminoácidos de la proteína, los radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catiónicos, neutros y aniónicos. Cualquier proteína tendría unacarga neta positiva si se encuentra en un medio lo suficientemente ácido debido a que los grupos COOH de los aminoácidos aspártico y glutámico estarían en su forma neutra pero los grupos amino de Arginina y lysina estarían protonados (-NH3+).
De igual forma si la proteína se encuentra en un medio con un pH muy alto estaría cargada negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo estaríandesprotonados (COO-) y los grupos amino estarían en su forma neutra (NH2).
De lo anterior se deduce que las proteínas tienen un pH característico al cual su carga neta es cero. A este pH se le denomina punto isoeléctrico (pI).
En el punto isoeléctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas por lo que la proteína presenta su máxima posibilidad para ser precipitada aldisminuir su solubilidad y facilitar su agregación.

Como todo aminoácido está compuesto de dos grupos, uno amino y uno carboxilo, el punto isoeléctrico se encargará de calcular la media de los pK’s de ambos grupos.
Este se calcula con la siguiente fórmula:

Una manera sencilla de precipitar a las proteínas es el ajustar el pH de su solución a su punto isoeléctrico. Se forma entonces unprecipitado reversible, que se disolverá tanto del lado alcalino como del lado acido del punto isoeléctrico. En el pI de la proteína, la carga neta es cero, favoreciéndose entonces la precipitación, por ser ese el punto de menor solubilidad en el agua.

Los alcoholes y la acetona son agentes desnaturalizantes de las proteínas ya que las deshidratan al competir por el agua de solvatación y por lotanto las precipitan.
Para demostrar la precipitación proteica con solventes orgánicos se utiliza el etanol. Aquí se puede ver la influencia del pH en este tipo de precipitación.
La precipitación por punto isoeléctrico se puede demostrar con una solución de acetato de caseína 0.1 N. Utilizando la fórmula de Henderson-Hasselbach se podrá calcular el pH de cada uno de los tubos y así determinar elpunto isoeléctrico de la caseína.
Esta ecuación es utilizada para conocer el valor del pH de una mezcla amortiguadora, es decir que es una expresión logarítmica que representa el valor del pH de un ácido débil y su constante de disociación.

Si en una disolución de proteínas se producen cambios de pH, alteraciones en la concentración, agitación molecular o variaciones bruscas de temperatura,la solubilidad de las proteínas puede verse reducida hasta el punto de producirse su precipitación. Esto se debe a que los enlaces que mantienen la conformación globular se rompen y la proteína adopta la conformación filamentosa. De este modo, la capa de moléculas de agua no recubre completamente a las moléculas proteicas, las cuales tienden a unirse entre sí dando lugar a grandes partículas que...