actividad enzimatica



Introducción

En teoría, en los animales superiores la digestión de almidón se inicia en la boca. La saliva, principalmente aquella producida por la parótida, contiene una enzima, la amilasa salival, un tipo de hidrolasa, llamada también ptialina. Ésta enzima de tipo proteico complejo, puesto que requiere del cofactor Ca+ cataliza la hidrólisis de polisacáridos con unionesα-1,4-glucosídicos (amilasa y amilpeptina de los polisacáridos), como el almidón (polímero de glucosas unidas con enlaces glucosídicos).Existen dos tipos de amilasa, la alfa amilasa que requiere de un activador, es resistente al calor y es sensible a una acidez elevada, y la beta amilasa que no necesita de un activador, pero es menos estable al calor. Las moléculas que resultan entonces, por acción de esta enzimason del disacárido maltosa. Pero la acción de la amilasa salival es de corta duración, el bolo alimenticio permanece en la boca durante el tiempo de la masticación y luego es deglutido. En el estómago, el ácido clorhídrico del jugo gástrico le confiere un pH de carácter ácido, cercano a 2. El pH óptimo de la amilasa salival se encuentra cercano a 7, por lo cual una vez llegado el bolo alimenticioal estómago se suspende la acción de la enzima. Se pueden medir niveles de amilasa en plasma, suero y orina lo cual sirve para detectar ciertas enfermedades. Por ejemplo en el caso de la pancreatitis, tanto aguda como crónica, debido a esta afección el páncreas libera amilasa en la sangre lo que puede ser detectado a través de exámenes de sangre. También se puede detectar un seudoquistepancreático mediante la medida de esta enzima. En algunos casos se ve alterada la cantidad de amilasa, por ingesta de algunos medicamentos, por ejemplo asparaginasa, ácido acetilsalicílico (aspirina), algunos anticonceptivos, colinérgicos, etc. Los niveles elevados de amilasa pueden ocurrir debido a cáncer de páncreas, colecistitis, gastroenteritis, oclusión intestinal, paperas, macroamilasemia, entre otrasy los niveles bajos de esta enzima pueden ocurrir debido a algún daño al páncreas, nefropatía, toxemia del embarazo, entre otras. En el siguiente informe se darán a conocer resultados de diferentes mediciones de absorbancia de muestras de amilasa salival, puesta diferentes medios, como cambios de temperatura y con reactantes como el lugol.



Materiales
1 Gradilla.
10 tubos de ensayo.
2Micropipetas (200 y 1000 µl)
3 vasos de precipitado ( 50 o 100ml)
Baño de Hielo (0°C).
Baño termoregulado (90°C).
Estufa a 37°C
Cubetas para espectrofotometría
Espectrofotómetro

Soluciones y reactivos
Solución de almidón al 2%
Lugol
Solución salina fisiológica (0,9%).
Agua destilada.
Saliva humana

Metodología
Tubo
Almidón 2%
[6 µl]
Concentración
%
Absorbancia
590nm
Aguadestilada
ml

I


0

0

0

4.5

II


250

0.1

0.445

4.25

III


500

0.5

0.813

4

IV


1000

1

1.507

3.5


V


1500

1.5

0.703

3

Observación: en el tubo número V se diluyó la muestra y se le midió su absorbancia nuevamente
NOTA: A cada tubo se le debe de agregar 500 μl de lugol y completar hasta 5 ml con agua destilada.
Experimento1:

Tubo I (1 ml de saliva diluida): 0.555 nm
Tubo II (1 ml de suero fisiológico): 0.610 nm
Observación: tubos I y II fueron diluidos

Experimento 2:

Tubo 1 (a 0°C): 1.124 nm
Tubo 2 (a T° ambiente): 1.135 nm
Tubo 3 (a 37°C): 1.173 nm
Tubo 4(a 90°C): 1.018 nm
Observación: todos los tubos fueron diluidos

Discusión
Los tubos que fueron diluidos (con 1 ml de solución y 2 ml de agua),debido a una absorbancia fuera del rango permitido por el espectrofotómetro, la cual fue medida nuevamente y registrada según cada muestra.
Este fenómeno fue producido por la alta concentración de almidón, lo que trajo como consecuencia niveles altos en el rango de absorbancia, pero al diluir una muestra esta baja su concentración y absorbe una mayor cantidad de luz, lo que nos hace volver a...