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EJEMPLO DE ESPECTROFOTOMETRIA
Para cualquier determinación y obtener la máxima sensibilidad se debe conocer la longitud de
onda de mayor absorción de la sustancia analizada, que no deberá coincidircon la de otras
sustancias en la muestra
La absorbancia es una medida de la cantidad de Energía luminosa incidente absorbida por una
sustancia en solución. Está relacionada con Transmitancia pormedio de :
A = - Log T A = log ( 100 / %T)
La Ley de Lambert y Beer expresa que la absorbancia de una solución es directamente
proporcional al camino recorrido por la radiación electromagnética y ala concentración de la
solución.
Que hacer para determinar la concentración de una sustancia que no tenemos antecedentes
Paso 1
Determinar la curva de calibración Absorbancia vs Concentración
-Preparar una muestra de concentración conocida, a partir de ella realizar diluciones
cuidando siempre de usar el mismo diluyente
- Determinar las absorbancias de estas muestras y la muestradesconocida
- Graficar Absorbancia vs concentración.
- El gráfico debe ser una recta (por la Ley de Lambert y Beer) y con ello obtener el factor
puesto que la pendiente de la recta es la misma en todos lospuntos; de lo contrario se
extrapola los valores
- Con lo anterior calcular la concentración de la muestra problema
Ejemplo
Se tiene una solución desconocida X 0,1 M y se tiene las siguientesabsorbancias
Longitud de Onda (λ)
300
350
400
450

Absorbancia
0,23
0,37
0,30
0, 29

Observar cuál es la longitud de onda de mayor absorción que se utilizará para realizar la curva decalibración y determinar la concentración de una muestra problema.
Confección de la curva absorbancia versus concentración
Se elige 350 λ por obtenerse la máxima lectura
Suponer que se realizarondiluciones y se obtuvo
1/10
0,367
1/20
0,372
1/30
0,371
Graficar absorbancia versus concentración.
Con la gráfica anterior se determina la concentración de la muestra problema; para ello se...