Anticuerpos monoclonales y policlonales

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Anticuerpos monoclonales
Un anticuerpo monoclonal es un anticuerpo homogéneo producido por una célula híbrida producto de la fusión de un clon de linfocitos B descendiente de una sola y única célula madre y una célula plasmática tumoral.
Los anticuerpos monoclonales (Mab, del inglés monoclonal antibody), son anticuerpos idénticos porque son producidos por un solo tipo de célula del sistemainmune, es decir, todos los clones proceden de una sola célula madre. Es posible producir anticuerpos monoclonales que se unan específicamente con cualquier molécula con carácter antigénico. Este fenómeno es de gran utilidad en bioquímica, biología molecular y medicina.

Obtención de anticuerpos monoclonales
En 1975 Kohler y Milstein desarrollaron la técnica de los hibridomas, mediante la quepueden producirse en el laboratorio anticuerpos monoclonales específicos para un antígeno (determinante antigénico) concreto. La técnica se desarrolló inicialmente utilizando células de ratón, pero en la actualidad se producen hibridomas a partir de células de varias especies, incluyendo la humana.
Fusión.
La técnica consiste básicamente en fusionar células linfoides (productoras de anticuerpos) concélulas de mieloma (tumorales) en presencia de poli-etilen-glicol (PEG), que provoca la fusión de las membranas y la formación de híbridos celulares. Las células productoras del anticuerpo se obtienen a partir de los órganos linfoides periféricos (bazo y/o ganglios linfáticos) de animales hiper-inmunizados con un antígeno o patógeno concreto. Las células de mieloma a utilizar deben reunir, almenos, las siguientes características:
• Ser histocompatibles con las células productoras de anticuerpos
• No secretar inmunoglobulinas
• No tener la enzima hipoxantina-guanina-fosforribosil-transferasa (HGPRT) Los híbridos resultantes pueden ser de cualquier tipo: Linfocito-Linfocito, Linfocito-Mieloma o Mieloma-Mieloma. Los que conocemos como Hibridomas son los híbridos Linfocito- Mieloma.Selección
Los hibridomas se recuperan cultivando la mezcla celular anterior en un medio de cultivo que contiene hipoxantina, aminopterina y timidina. La aminopterina es un inhibidor del ácido fólico, sustancia que interviene en la síntesis de los nucleósidos y nucleótidos necesarios para la replicación del DNA. En este medio (y en cualquiera que se use) los híbridos LB-LB y los LB no fusionadosmueren, ya que tienen una vida media limitada. Los híbridos M-M y las células de mieloma no fusionadas mueren por carecer de la enzima HGPRT. La células que sobreviven son los hibridomas LB-M, que heredan la capacidad de vivir indefinidamente y la alta capacidad biosintética propias de la célula tumoral y la capacidad de producir anticuerpos y sintetizar guanina vía HGPRT de los linfocitos B.
HGPRTparticipa en la llamada “vía de salvamento”, mediante la cual una célula puede usar la hipoxantina como precursor de otras bases nitrogenadas aun en presencia de aminopterina. Como en la fusión se usan células linfoides procedentes de un animal hiper-inmunizado, una parte de los hibridomas obtenidos son productores de anticuerpos y cada hibridoma produce un solo anticuerpo (monoclonal). Tras laselección en medio HAT las células supervivientes se reparten en los pocillos de placas de cultivo (rico en nutrientes e idóneo para la proliferación celular) y se incuban para que se produzca su crecimiento. En aquellos pocillos que presentan un crecimiento adecuado se recogen muestras del sobrenadante y se analizan en ELISA para ver si contienen anticuerpos específicos para el antígeno inicial (conel que se hiper-inmunizó inicialmente al animal utilizado). Las células de los pocillos positivos se recuperan y, mediante un proceso de dilución límite o clonación, se reparten en los pocillos de nuevas placas a 1 célula por pocillo. Los pocillos que producen buenos clones se muestrean en busca de los anticuerpos y, los positivos, se vuelven a clonar.

Mantenimiento
Los hibridomas productores...
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