Biotecnologia vegetal

CONSEJERÍA DE INNOVACIÓN, CIENCIA Y EMPRESA CONSEJERÍA DE AGRICULTURA Y PESCA. 2005 Editan: IFAPA Empresa Pública Desarrollo Agrario y Pesquero Financia: Programa de Mejora de la Calidad de la Producción de Aceite de Oliva y de Aceitunas de Mesa Diseño y maquetación: Ideagonal diseño gráfico Imprime: Egondi Artes Gráficas, S.A. Depósito legal: SE-2499-05

MARCADORES MOLECULARES PARA LA MEJORAGENÉTICA, IDENTIFICACIÓN Y TRAZABILIDAD DEL OLIVO, LA ACEITUNA Y EL ACEITE DE OLIVA
Gabriel Dorado1*, Pilar Rallo2, Pilar Hernández3, María José Giménez3, Yoselín Benítez4, Aurora Díaz3, Raúl de la Rosa5, José Luis Caballero1, Juan Muñoz-Blanco1, Antonio Martín3 1Dep. Bioquímica y Biología Molecular, Campus Rabanales C6–1–E17, Universidad de Córdoba, 14071 Córdoba; 2Dep. Ciencias Agroforestales,Ctra. Utrera km 1, Universidad de Sevilla, 41013 Sevilla; 3Instituto de Agricultura Sostenible (IAS), Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC), Alameda del Obispo s/n, 14071 Córdoba; 4Delbruck Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory, One Bungtown Road, ZIP 11724, New York (USA); 5Instituto de Investigación y Formación Agraria, Pesquera, Alimentaria y de la Producción Ecológica(IFAPA), Alameda del Obispo s/n, 14071 Córdoba *Autor para correspondencia: Gabriel Dorado, Dep. Bioquímica y Biología Molecular, Campus Rabanales C6–1–E17, Universidad de Córdoba, 14071 Córdoba (Spain); eMail ; Tel: +34 957 218689; Fax: +34 957 218592

INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS
Los marcadores moleculares son patrones proteicos o de ácidos nucleicos que pueden servir para identificar individuos,cultivares o especies. Asimismo, pueden emplearse para identificar características de interés, as las que pueden estar asociados. Hace algunos años se emplearon bastante los marcadores basados en proteínas (como enzimas y proteínas de reserva). Actualmente son más populares los marcadores basados en ácidos nucleicos; sobre todo DNA, por lo que este trabajo versará sobre los mismos. Los marcadores de DNAse pueden clasificar en dos grandes grupos: marcadores moleculares anteriores a la tecnología de amplificación in vitro, como la “Reacción en Cadena de la Polimerasa” (PCR; del inglés “Polymerase Chain Reaction”) y los posteriores a dicha tecnología. El “Polimorfismo de Longitud de Fragmentos de Restricción” (RFLP; del inglés,“Restriction Fragment Length Polymorphism”) es un marcador molecular basadoen DNA que no emplea metodologías de amplificación in vitro como la PCR. Entre sus ventajas destaca el hecho de presentar una herencia codominante que permite diferenciar al heterocigoto de cada uno de los homocigotos, así como el hecho de ser transferible. No obstante, requieren disponer previamente de las sondas apropiadas (idealmente homólogas, aunque a veces pueden emplearse sondasheterólogas). Su gran inconveniente es el tiempo y mano de obra que requiere. Este tipo de marcador molecular está siendo sustituido por otros basados en PCR, por su comodidad, rapidez, posibilidad de automatización, etc. Entre los marcadores moleculares basados en PCR cabe destacar el “DNA Polimórfico Amplificado al Azar” (RAPD; del inglés, “Random Amplified Polymorphic DNA”), que presenta la ventaja de norequerir conocimiento previo de la secuencia. Es por ello particularmente útil en especies como el olivo, en que se conoce muy poco de su genoma. Sin embargo, puede ser poco consistente entre experimentos o laboratorios, a menos que se controlen las diferentes condiciones experimentales (enzima polimerasa de DNA empleada, perfiles de amplificación, soporte electroforético, etc). Los RAPDs suelenpresentar una herencia dominante que no diferencia al heterocigoto de uno de los homocigotos, no siendo transferibles. Además, su patrón de bandas en el gel puede ser difícil de interpretar en algunos casos. Por ello hemos desarrollado marcadores de “Región Amplificada de Secuencia Caracterizada” (SCAR; del inglés “Sequence–Characterized Amplified Region”) para evitar dichos problemas. Estos marcadores...