Bradford

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Tabla1: Absorbancia de la BSA a 595nm y distintas concentraciones
Cantidad de BSA (µL) | Absorbancia 1 (nm) | Absorbancia 2 (nm) | Absorbanciapromedio(nm) | Absorbancia BSA (nm) |0 | 0,1867 | 0,1994 | 0,1931 | 0,0000 |
2 | 0,2115 | 0,2265 | 0,2190 | 0,0259 |
4 | 0,2341 | 0,2345 | 0,2343 | 0,0412 |
6 | 0,2208 | 0,2389 | 0,2299 | 0,0368 |
8 | 0,2939 | 0,3105 | 0,3022| 0,1091 |
10 | 0,2970 | 0,3061 | 0,3016 | 0,1085 |
20 | 0,4107 | 0,4053 | 0,4080 | 0,2149 |
30 | 0,4597 | 0,5974 | 0,5286 | 0,3355 |
40 | 0,9782 | 0,9374 | 0,9578 | 0,7647 |
50 | 0,5339 |0,6275 | 0,5807 | 0,3876 |

La absorbancia promedio a una cantidad de 0 µL de BSA (0,1931 nm) se usa como blanco y se resta a las absorbancias promedio del resto de las muestras para obtener laabsorbancia correspondiente a la BSA.

Gráfico 1: Curva de calibración considerando todos los puntos de la tabla 1 (0 a 50 µL de BSA)
La curva de calibración del gráfico 1 da un R2 = 0,748 lo queindica que los datos están muy dispersos y la curva resultante no es representativa a un comportamiento lineal.
Si se considera que el rango del método de Bradford es de 1 a 10 µg de proteína y sequiere la mayor cantidad de puntos en la recta, puede eliminarse los puntos correspondientes a 40 y 50 µL de BSA por no ser estadísticamente significativos y así reconstruir el gráfico con el nuevorango (gráfico 2)

Gráfico 2: Curva de calibración considerando un rango de datos de 0 a 30 µL de BSA resultando un R2 cercano a 1
El gráfico 2 presenta un R2=0,9851 que es muy cercano a 1 lo quehace de esta curva lo suficientemente representativa para ser usada como referencia para calcular la concentración de las muestra problema a partir de la ecuación de la recta y = 0,0112x – 0,0027donde y = absorbancia correspondiente a la de las muestras problema, obtenida de restar la absorbancia promedio con la absorbancia blanco de BSA (0,1931 nm), y x=concentración de la...
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