Cromatografía de Interacción Hidrofóbica

Cromatografía de interacción hidrofóbica

La Cromatografía de interacción hidrófoba implica la separación de moléculas de proteína debido a la interacción diferencial de estas moléculas con sitios hidrófobos sobre la superficie de un soporte sólido. En el proceso de separación, parches hidrófobos sobre la proteína interactúan con las moléculas hidrofóbicas (por ejemplo, residuos de alquilo)inmovilizados sobre la superficie de fase sólida hidrófila (agarosa).
Introducción
Dos sistemas cromatográficos fundamentales que emplean medios hidrófobos se han descrito: (a) de fase inversa y (b) cromatografía de interacción hidrófoba. En la cromatografía de interacción hidrófoba los solutos (proteínas) son adsorbidos y separados en una fase sólida estacionaria (es decir, un sistema de dosdimensiones) que porta grupos hidrófobos inmovilización Lized. En fase inversa cromatografía los solutos se absorben y son separados (particionado) en una fase estacionaria apolar líquida (es decir, un sistema de tres dimensiones) y no en la fase sólida. Debido a la gran diversidad de alcance y metodológicos detalles, cromatografía de fase inversa no será tratado aquí. Lo mismo ocurre con las formashidrofóbicas de cromatografía de reparto líquido liquidez. Una diferenciación tampoco se hizo entre los sistemas cromatográficos clásicos y HPLC (de alta presión o la cromatografía líquida de alto rendimiento), ya que en esencia sólo el tamaño del grano y bajo monodispersidad, no la superficie hidrofóbica, conduce a la realización más alta (egthroughputandresolution) en el último método.Interacciones no covalentes del tipo hidrófobo se han descrito como "el inusualmente fuerte atracción entre las moléculas y superficies no polares en agua '(Israelachvili, 1985). Las interacciones hidrofóbicas son impulsados ​​por la extrusión de una capa monomolecular de moléculas de agua ordenadas cubriendo dos superficies hidrofóbicas adyacentes en menos- ordenó agua a granel con un pliegueconcomitantin en entropía. Del underthe conditionofDH! Negativo TDSthe Gibbs freeenergyis (2DG? TDS) que constituye una entropía de reacción conducido. Esta atracción entropía impulsada entre los grupos no polares en agua es la base para la cromatografía de interacción hidrofóbica (para revisión ver Jennissen, 2000). En 1972, el grupo de Yon y el grupo de Shaltiel informaron de forma independiente lasproteínas Separationof cromatográficos por medio de interacciones hidrofóbicas (Er-el et al, 1972;. Yon, 1972). En ambos casos, la matriz hidrófoba constaba de agarosa (Sepharose 4B, Pharmacia) a la que aminoalcano derivados habían sido acoplados por el CNBr (bromuro de cianógeno) método (para revisiones ver Jennissen, 1995; Shaltiel, 1984; Yon, 1977). El resultado sorprendente en los experimentos deShaltiel (Er-el et al., 1972) fue que una enzima hidrofílica normal, fosforilasa b, podría ser purificó sobre aC 4-hidrocarburos-revestido de agarosa cerca de la homogeneidad en un solo paso, cuestionando implícitamente la doctrina general de el momento en que todos los aminoácidos hidrófobos están enterrados en el interior de las proteínas. Fosforilasa fue adsorbido a baja fuerza iónica sobreresiduos de butilo inmovilizados que no tenían ningún parecido con los sustratos de la enzima (excluyendo de este modo un tipo bioA fi nidad de adsorción) y se eluyó por una 'deformación er ff bu', que llevó a una licencia limitada, reversible despliegue de la enzima. De este trabajo en general se concluyó que aquí era un nuevo método aplicable no sólo a hidrófobo o lipófilo, sino también para hidrófiloy posiblemente para todas las proteínas. El nombre 'cromatografía hidrofóbica' acuñado por Shaltiel por lo tanto pronto llegó a su uso generalizado.
Fundamentos de la cromatografía de interacción hidrofóbica
La fase estacionaria
Uno de los requisitos previos para una separación por cromatografía óptima de proteínas por interacciones hidrofóbicas es una fase estacionaria extremadamente...