Determinacion De Azucares Reductores

DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE ZUCARES REDUCTORES POR EL METODO DEL DNS. El método se basa en la oxidación del grupo aldehído o cetona presente en el azúcar y la respectiva reducción del DNS a ácido3-amino-5-nitrosalisílico. Esta reacción produce un complejo coloreado que presenta la mayor actividad óptica en una longitud de onda de 540 nm, lo cual permite realizar una gráfica a diferentesconcentraciones de una solución patrón de glucosa, para luego identificar la cantidad de azúcares reductores presentes en una muestra. Pasos para preparar DNS ( Ácido 3-5 dinitrosalicílico) • • • • •Disolver 1.6 g de NaOH en agua destilada Adicionar 30 g de tartrato de Na y K Adicionar 1 g de DNS Aforar a 100ml con agua destilada. Almacenar en frascos ámbar a 4°C

Pasos para preparar la curvaestándar • Pesar 0.2 g de glucosa, diluir con agua destilada y llevar a un balón volumétrico de 50 ml Tomar 7 tubos de ensayo y depositar en cada uno de ellos las cantidades de solución de glucosa preparaday agua que se observan en la tabla A1 Realizar mediciones a 540 nm y construir la curva.

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Tabla A.1. Concentraciones de glucosa para la elaboración de la curva patrón Concentración (g/l)Glucosa ml H2o (ml) Volumen total 0.2 0.025 0.475 0.5 0.4 0.05 0.450 0.5 0.6 0.075 0.425 0.5 0.8 0.1 0.4 0.5 1 0.125 0.375 0.5 1.2 0.15 0.35 0.5

Tratamiento de las muestras • • • • • • • • • Tomar0.5ml de cada disolución estándar y agregar 0.5ml de reactivo DNS Tomar 0.5ml de cada muestra al 10% y agregar 0.5ml de reactivo de DNS. Preparar un blanco por dilución con agua destilada y 0.5ml dereactivo de DNS. Agitar todas las muestras. Colocar a ebullir las muestras en baño de María por 5 minutos. Enfriar con hielo. Adicionar 5ml de agua destilada. Agitar y dejar en reposo por 15minutos.Leer a 540Nm en el espectrofotómetro.

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Azucares reductores DNS
0,800

0,700

0,600

y = 0,6096x - 0,032 R 2 = 0,9995

0,500

Absorbancia

0,400

0,300

0,200

0,100...