Determinacion de los coeficientes de proteinas

ANALISIS SOBRE la Determinación de los coeficientes de absorción de las proteínas purificadas por espectrofotometría ultravioleta y cromatografía convencional combinado con la detección de múltiples longitudes de onda
En The direct, ultraviolet spectrophotometric determination of protein absorption coefficients was found to be more reproducible and accurate when diluting was replaced bychromatography and multiwavelength detection. cuanto a la determinación directa, la espectrofotometría ultravioleta de los coeficientes de absorción de la proteína se encontró que era más reproducible y precisa al diluir fue sustituido por cromatografía y la detección de múltiples longitudes de onda. Four different ultraviolet spectrophotometric methods, described in the literature, were compared bycalculating A0.1%280 values from the spectra of 25 proteins, obtained by chromatography. Existen cuatro diferentes métodos de espectrofotometría estos son: Espectroscópicos, moleculares, espectroscopia de emisión atómica, y espectroscopia de absorción atómica que se describe en la literatura, por lo tanto realizan una compararon mediante el cálculo A0.1 280% los valores de los espectros de 25proteínas, obtenidos por cromatografía. Only two methods, ie, one based on the absorbance at 210 nm and the other on the absorbance at 205 nm, corrected for the absorbance of aromatic amino acids at that wavelength, were sufficiently accurate to be of potential use for the determination of unknown proteins. Sólo dos métodos, es decir, uno basado en la absorbancia a 210 nm y el otro en la absorbancia a 205nm, corregida por la absorción de los aminoácidos aromáticos a esa longitud de onda, eran lo suficientemente precisos para ser de utilidad potencial para la determinación de proteínas desconocidas. It was found, however that with uncorrected A203 values even better results could be achieved. Se encontró, sin embargo, que con los valores A203 sin corregir aún mejores resultados pueden alcanzarse.Using 7 well-defined proteins the equation A0.1%280 = 38.69 X A280/A203 - 0.01 was established by linear regression. Usando 7 proteínas bien definidas la ecuación A0.1% 280 = 38,69 A280/A203 X - 0.01 se estableció mediante regresión lineal. A0.1%280 values for 14 pure proteins calculated with this equation showed a mean deviation of only 4% from literature values. A0.1 280% los valores para 14proteínas puras calculado con esta ecuación mostró una desviación media de sólo el 4% de los valores de la lectura. Since similar deviations were seen with 5 chromophoric and 7 glycoproteins, 3 and 7% respectively, the method may have universal applicability. Desde desviaciones similares se observaron con 5 cromóforos y glicoproteínas 7, 3 y 7%, respectivamente, por tanto se determino que el métodopuede tener una aplicación universal. In the configuration used, only 40 micrograms of a protein is required for the chromatographic determination of its absorption coefficient. En la configuración utilizada, sólo 40 microgramos de una proteína son necesarios para la determinación cromatográfica de su coeficiente de absorción.
En los estudios realizados es constante que nos enfrentemos con elproblema de la caracterización de un purificado, en este caso sobre una proteína desconocida por lo que se requiere una precisa determinación de su concentración; es así que se realizan varias purificaciones enzimáticas, pero al determinarlas se llega a la conclusión de que al terminar con el procedimiento nos encontramos con pequeñas cantidades de proteína, y con un simple método como ladeterminación del peso seco, por lo que, no siempre es factible o no es apropiado ya que cuenta con pérdida inherente de material activo; en cambio con el índice de refracción las determinaciones de la concentración las medidas son confiables, pero no es confiable si es aplicada a las proteínas con un grupo cromóforo o hidratos de carbono.

Generalmente el que es más rápido y fácil de realizar es el...