Factores de la actividad enzimatica

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ctividad enzimat
FUNDAMENTO TEORICO

LAS ENZIMAS son proteínas específicas con excepción de las ribozimas, que actúan como catalizadores de las reacciones bioquímicas en todos los seres vivos. La actividad de estas moléculas tan particulares puede comprobarse experimentalmente mediante la identificación y cuantificación de los productos formados en las reacciones que ellas regulas. La acciónde estos compuestos nitrogenados en una reacción se ve afectada por la variación de factores físicos y químicos tales como la temperatura, la concentración de enzima y del sustrato, el pH, etc.

El peróxido de hidrogeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos pero debido a su toxicidad debe transformarse rápidamente en compuestos menos peligrosos. Para ellos las célulasutilizan n la catalasa que descompone el H2O2 en agua y oxigeno.
2 H2O2 2H2O + O2

Esta reacción puede observarse por la formación de burbujas, las cuales se producen debido al desprendimiento de oxigeno. La cantidad de las mismas es directamente proporcional a la intensidad de la reacción y puede utilizarse como una medida de ella. En esta actividad delaboratorio se diseñaron experimentos para verificar en el laboratorio la actividad de enzima y por lo último compararla con la actividad de un catalizador inorgánico (MnO2).

ACTIVDAD EXPERIMENTAL
1.1PROBLEMA
¿Cuáles factores físico-químicos afectan la actividad de la enzima que vamos a estudiar en el laboratorio?
Para identificar el comportamiento de la enzima (peroxidasa) es necesario:A. Reconocer la presencia de la enzima (peroxidasa), presente en tejidos animales y vegetales por medio del desprendimiento de burbujas y la producción de calor.
B. Comparar la acción de la peroxidasa (catalizador orgánico) y del MnO2 (catalizador inorgánico) sobre el mismo sustrato (agua oxigenada).
C. Establecer el efecto de factores como el PH y la temperatura en la intensidad de lareacción.
1.2 MATERIALES Y REACTIVOS
Muestras y equipos | reactivos | Muestras |
20 tubos de ensayo | Peróxido de hidrogeno al 5% | Espinaca |
1 gradilla | HCl 3M | Papa criolla |
1 pipeteador | NaOH 3M | Champiñones |
2 goteros | Buffer de fosfato al 0.02M pH=7 | Hígado de res |
1 pinza para tubos | HgCl3. 1%(cloruro mercúrico) | |
3pipetas de 5ml y 2 de 1ml | MnO2 | |
Bañotermostato |
Vasos de precipitado2X250mL; 2X100mL |
1 cronometro |
1 espátula |

1.1.3 PROCEDIMIENTO
A. PREPARACION DE LOS HOMOGENADOS
* Preparar homogenado, por separado, a partir de fragmentos de papa, hígado, champiñones y espinacas en una licuadora con 150mL de agua destilada, hasta diluir parte de la muestra.
* Colocar cada homogenado en un vaso de precipitado previamenterotulado
B. VERIFICACION DE LA ACIVIDAD DE LA CATALASA
Tomar cinco tubos de ensayo, en los cuatro primeros colocar 3mL de cada homogenado (agitarlo antes de su uso) y en el quinto agua destilada como blanco. En cada tubo hacer una marca para indicar hasta donde llega el homogenado adicionar 3mL de peróxido de hidrogeno a cada tubo. Observe y registrar el cambio en el nivel del liquido de cada tubo.Anotar en una tabla las observaciones y resultados correspondientes.

C. EFECTOS DE LA TEMPERATURA
Tomar 4 tubos de ensayo, añadir 5mL de hígado homogenado a cada tubo, luego rotular e incubar de acuerdo con la tabla
tubo | Incubación |
1 | 80ºC colocar tubo por 7 minutos |
2 | 37ºC colocar tubo por 5 minutos |
3 | Temperatura ambiente |
4 | En congelador 4ºC dejar por 1 hora |1. Después del tiempo de incubación de cada tubo; toar el cronometro, este es el tiempo cero. Añadir inmediatamente 2mL de peróxido de hidrogeno a cada tubo y registrar el tiempo en que empiezan a producirse las burbujas.
2. Anotar las observaciones y resultados en la tabla correspondiente.

D. EFECTO DEL PH SOBRE A ACTIVIDAD ENZIMATICA
Tomar 3 tubos de ensayo, añadir 1mL de hígado...
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