Hormonas hipofisarias y osmorregulación en el pejerrey "odontesthes bonariensis"

IIB-INTECH UNSAM-CONICET

Hormonas hipofisarias y osmorregulación en el pejerrey (Odontesthes bonariensis)
Tesis para optar por el grado de Licenciado en Biotecnología de la UNSAM
Martín Blasco 9/15/2004
Resumen Las hormonas hipofisarias GH y PRL están relacionadas con una gran cantidad de funciones en vertebrados. Una de ellas es el balance hidrosalino, el cual es controlado en parte porlas respuestas de los niveles de estas hormonas frente a variaciones de osmolalidad del plasma. En peces teleósteos modernos el rol de estas hormonas en este aspecto fue poco estudiado. Adicionalmente, la importancia de estas hormonas en parámetros de interés para la acuicultura como el estrés y tasa de crecimiento, motiva el estudio ya que este conocimiento indicaría la potencialidad del manejopara la mejora de las condiciones de crianza. En el presente trabajo se estudiaron las respuestas de los niveles de ARN mensajero de GH y PRL a diferentes salinidades del medio. Para el caso de GH, se determinó que en salinidades correspondientes a 3 y 7 ppt los comportamientos fueron similares, mientras que a 14 ppt los niveles de GH aumentaron. En el caso de animales en 21 ppt de sal, se observóun aumento transciente de los niveles de GH. Estas observaciones llevan a formular nuevas hipótesis en las cuales se plantea el efecto de la salinidad sobre la disponibilidad de metabolitos con fines anabólicos y el efecto de estos sobre los niveles de GH. Para el caso de PRL las variaciones fueron mínimas aunque con una tendencia al aumento, esta observación no puede correlacionarse claramentecon la salinidad pero puede tener su origen en algún factor de estrés o puede estar evidenciando un control a nivel de la traducción o en un estadio superior del control de la producción y liberación de esta hormona A pesar de la evidencia experimental respecto de la correlación de los niveles de ARN mensajero con los niveles plasmáticos de GH, se requiere de medios que permitan la cuantificaciónde los niveles de hormona en plasma. Esto requiere de anticuerpos específicos contra la hormona, de modo que como primer paso se procedió al clonado y expresión de la hormona de crecimiento de pejerrey con el objetivo de obtener anticuerpos y proteína nativa para desarrollar un método de detección de la hormona en plasma (ELISA o RIA) o en gránulos de secreción (inmunocitoquímica). El estudiopreliminar y la evidencia bibliográfica indican que la factibilidad de éxito en estas tareas es alta.

Agradecimientos
Al Dr. Somoza, por su capacidad de orientar las fuerzas, su contagiosa actitud positiva y la ayuda brindada. Al Dr. Miranda, por su compañerismo y estímulo. A los compañeros de laboratorio por su ayuda, en especial al Lic. Strobl. Al grupo de becarios del INTECH, por su ayuda ycompañerismo en la transición Capital-INTECH A mis padres, por su apoyo incondicional. A la Universidad pública y gratuita.

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Índice temático
Resumen Introducción
Características generales del animal de estudio Acuicultura del pejerrey Crecimiento y osmorregulación Características de la osmorregulación en peces eurihalinos Osmorregulación: Proteínas hipofisarias involucradas

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Objetivos de esta tesina
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Materiales y métodos
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Material de estudio Obtención de peces Separación de las muestras para experimentos Experimentos de salinidad Almacenamiento de los órganos para la determinación de ARNm Extracción de ARN Obtención de los ADNc Oligonucleótidos Obtención de las secuencias Diseño de oligonucleótidos específicos Determinación delos niveles de expresión de ARNm Dot blot Tratamiento estadístico de los datos Clonado y expresión de pjGH en E. coli (BL21) 18 18-19 19 20 20 21 22-23 23-26 26-29 29-30 30-31 31-36 36 36-39

Resultados
40-55
Reacciones de amplificación (PCRs) 40 Secuencias obtenidas con oligonucleótidos consenso 40-44 Puesta a punto de la amplificación de los fragmentos de β-actina, GH PRL y SL para PCR...