Introduccion a la microsopia

INTRODUCCION A LA MICROSCOPIA

La microscopia es la técnica de generar imágenes visibles (microscópicas) de estructuras o detalles demasiado pequeños para ser observados por el ojo (macroscópicamente). El aparato que lo hace posible es el microscopio
Exceptuando técnicas como el microscopio de fuerza y el microscopio de efecto túnel, la microscopia generalmente implica la difracción,reflexión o refracción de radiación incidente en el sujeto o muestra de estudio.
El microscopio es el instrumento principal para el estudio de la célula y de los tejidos. El más simple es una lente de aumento o un par de anteojos. El poder de resolución del ojo humano es de 0,2 mm, es decir, que para ver dos objetos separados, estos deben estar como mínimo a esa distancia.
La resolución depende de lalongitud de onda de la fuente luminosa, el espesor del espécimen, la calidad de fijación y la intensidad de la coloración.
Teóricamente la máxima resolución que se puede alcanzar es de 0,2 um dada por una luz con longitud de onda de 540 nm, la cual pasa por un filtro verde (muy sensible por el ojo humano) y con lentes condensadoras y de aumento adecuadas. El ocular (lente por la que observamos)aumenta la imagen producida por el objetivo, pero no puede aumentar la resolución.

Existen varios tipos de microscopios, que podemos a grupar en dos variedades microscopio óptico y el microscopio electrónico.

Microscopia óptica

El poder de resolución (PR), es la propiedad más importante en un microscopio, ya que de ella depende la nitidez con que se perciben los detalles. También sedenomina poder separador de una lente, y es la capacidad que posee de separar dos puntos muy cercanos en el campo visual, como entidades diferentes.
El aumento o amplificación de un microscopio es la relación entre el tamaño de la imagen que vemos y el objeto real.
La apertura numérica del objetivo (AN), es un parámetro constante para cada lente, que mide su capacidad para concentrar la luz y permitecalcular el poder de resolución y el tamaño mínimo observable.
El límite de resolución (D), es la distancia mínima que debe separar a dos puntos de la muestra para ser definidos de forma independiente. Según la longitud de onda de la radiación utilizada se pueden apreciar los objetos con mayor o menor detalle. Así, la microscopia de radiación ultravioleta, que tiene una longitud de onda máscorta que la visible, permite conseguir fotografías con más detalle que las obtenidas con luz ordinaria.
Con valores de longitud de onda mínima y la mayor apertura numérica posible, se puede determinar el límite de resolución del microscopio óptico, obteniéndose un valor aproximado a 0,0002 mm, que permite resolver los orgánulos celulares de mayor tamaño: el núcleo y las mitocondrias. Un valorbastante respetable teniendo en cuenta que el límite de resolución del ojo humano es de 0,1 mm.
También se puede mejorar la calidad de la observación mediante la inmersión de la lente del objetivo en un aceite adecuado, como el de cedro, pero se pierde nitidez.

La muestra debe ser una lamina plana, rígida y delgada, y puede estar coloreada, pero no contener agua (que distorsiona la luz). Estosrequisitos son necesarios para que la muestra pueda enfocarse, se manipule con facilidad, deje pasar la luz a través de ella y se puedan diferenciar en ella las distintas estructuras. Para ello, la muestra debe prepararse cuidadosamente, obteniendo cortes delgados. Si se observa una muestra en fresco, debe dejar pasar la luz a su través, si no, sólo veremos su contorno. Mientras mas delgada sea lamuestra y menos agua contenga, mas resolución obtendremos

Tipos de microscopios ópticos

Una dificultad en al observación microscópica es el escaso contraste que presenta el material biológico debido a su alto contenido en agua. Para mejorar el contraste se utilizan las tinciones, pero eso implica que las células queden muertas en la fijación.
Para estudiar el material vivo se emplea el...