METODO DETERMINACION DE PROTEINAS

METODOS PARA DETERMINACION DE PROTEINAS

Resumen
Las proteínas tiene propiedades como, punto isoeléctrico, solubilidad, capacidad amortiguadora,
desnaturalización y re-naturalización, con base en lo anterior, existen métodos y sustancias que reaccionan
con alguna propiedad de las proteínas, así es posible su identificación y su posible presencia en una
sustancia que contenga diferentes clases deproteínas.
Palabras claves: Enlace peptidico, coloración, precipitación de proteína, desnaturalización.

Las proteínas tienen un comportamiento anfótero y
esto las hace capaces de neutralizar las variaciones de
pH del medio, ya que pueden comportarse como un
ácido o una base y por tanto liberar o retirar protones
(H+) del medio donde se encuentran.

INTRODUCCION
Determinar la concentración deproteínas en una
muestra biológica es una técnica de rutina básica
cuando se aborda un esquema de purificación de una
proteína concreta, cuando se quiere conocer la
actividad específica de una preparación enzimática,
para el diagnóstico de enfermedades, así como para
otros muchos propósitos.

Desnaturalización y renaturalizacion
La desnaturalización de una proteína se refiere a la
ruptura de losenlaces que mantenían sus estructuras
cuaternaria, terciaria y secundaria, conservándose
solamente la primaria. En estos casos las proteínas se
transforman en filamentos lineales y delgados que se
entrelazan hasta formar compuestos fibrosos e
insolubles en agua. Los agentes que pueden
desnaturalizar a una proteína pueden ser: calor
excesivo; sustancias que modifican el pH; alteraciones
en laconcentración; alta salinidad; agitación
molecular; etc... El efecto más visible de éste fenómeno
es que las proteínas se hacen menos solubles o
insolubles y que pierden su actividad biológica.

Existen diferentes métodos para la cuantificación de
proteínas. Muchos de estos métodos se basan en:
a) La propiedad intrínseca de las proteínas para
absorber luz en el UV.
b) para la formación de derivadosquímicos.
c) La capacidad que tienen las proteínas de unir
ciertos colorantes.
PROPIEDADES DE LAS PROTEINAS
Solubilidad
Las proteínas son solubles en agua cuando adoptan
una conformación globular. La solubilidad es debida a
los radicales (-R) libres de los aminoácidos que, al
ionizarse, establecen enlaces débiles (puentes de
hidrógeno) con las moléculas de agua. Así, cuando
una proteína se solubiliza quedarecubierta de una
capa de moléculas de agua (capa de solvatación) que
impide que se pueda unir a otras proteínas lo cual
provocaría su precipitación (insolubilización). Esta
propiedad es la que hace posible la hidratación de los
tejidos de los seres vivos.

Especificidad
Es una de las propiedades más características y se
refiere a que cada una de las especies de seres vivos es
capaz de fabricarsus propias proteínas (diferentes de
las de otras especies) y, aún, dentro de una misma
especie hay diferencias proteicas entre los distintos
individuos. Esto no ocurre con los glúcidos y lípidos,
que son comunes a todos los seres vivos.

Capacidad amortiguadora

Método de Biuret

MÉTODOS
PROTEÍNAS

1

PARA

DETERMINACIÓN

DE

Se basa en la formación de un complejo coloreado
entre el Cu2+ y losgrupos NH de los enlaces
peptídicos en medio básico. 1Cu2+ sea compleja con 4
NH. La intensidad de coloración es directamente
proporcional a la cantidad de proteínas (enlaces
peptídicos) y la reacción es bastante específica, de
manera que pocas sustancias interfieren. La
sensibilidad del método es muy baja y sólo se
recomienda para la cuantificación de proteínas en
preparados muy concentrados (Reyesand Cejudo).

albúmina en orina, por el color anaranjado de la
reacción final (Quiñones Zahira 2004).
La reacción se torna amarilla, naranja o verde en
presencia de Tirosina, Fenilalanina, o Triptófano,
reacción positiva. La reacción será incolora en
presencia de otros aminoácidos, reacción negativa.
Prueba de Lieberman-Burchard
El anhídrido acético se condensa con el grupo OH en
posición C-3...