microbilogia practika






AREA DE LA SALUD HUMANA

MEDICINA
MODULO IV


















INFORME DE LABORATORIO
1. TEMA: VDRL

2. OBJETIVOS:
Conocer el fundamento de la prueba VDRL: pruebas treponémicas y no treponémicas.
Realizar en forma demostrativa tanto la técnica cualitativa como la semicuantitativa.
Interpretar los resultados: reactivos, no reactivos,falsos positivos, falsos negativos y la evolución de los títulos de anticuerpos post-tratamiento.
3. FUNDAMENTO TEÓRICO
Introducción
La sífilis es una enfermedad infecciosa cuyo agente causal es el Treponema Pallidum, perteneciente junto con otros treponemas (borrelias y leptospiras) a la familia Treponemataceae.
El mecanismo de transmisión es por contacto directo con las lesiones, por paso através de la placenta o por transfusiones de sangre contaminada. Tras un periodo de incubación de 2 a 90 días aparece en el lugar de la inoculación una lesión primaria rica en treponemas que desaparece en algunas semanas. Durante esta etapa, llamada sífilis primaria el T. Pallidum se multiplica en los ganglios y se distribuye por la sangre a todos lo órganos del individuo (infecciónsistémica). En el segundo estadio, la manifestación mas frecuente es el exantema que puede afectar a cualquier superficie del cuerpo acompañado de síntomas generales; las lesiones abiertas son muy contagiosas. Tras la primera desaparición espontánea de la misma durante el primer y segundo año pueden aparecer brotes tardíos similares cada vez de menor intensidad (fase de latencia precoz) hasta que desaparecentodos los síntomas y signos (fase de latencia tardía). En la evolución de los casos no tratados se puede presentar un periodo terciario con posibilidad de alteraciones mucocutáneas y de los sistemas óseo, cardiovascular y nerviosos (neurosífilis).
La identificación del T. Pallidum mediante el examen directo del exudado de la lesión (campo oscuro y/o fluorescencia) es una prueba definitiva paraasegurar el diagnóstico, aunque resulta un falso negativo del mismo no descarta la posibilidad de la enfermedad, ya que la presencia de treponemas puede ser escasa dependiendo de los días de evolución y de tratamientos previos.

OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS
1. Para la microscopia en campo oscuro, la muestra debe ser fluido seroso libre de eritrocitos y residuos de tejidos o puede ser materia¡obtenido por aspiración de ganglio; se limpia la lesión con solución salina, sólo si estuviera contaminada. Puede ser necesario realizar una abrasión leve de la lesión, para obtener fluido seroso, el cual se coloca directamente en una lámina, la que debe examinarse antes de transcurridos 20 minutos, ya que el Treponema pallidum es muy sensible al oxígeno, calor, cambios de pH y desecación. Nunca sedebe tomar para campo oscuro muestras de cavidad oral, o anal debido a la contaminación con espiroquetas no patógenas.
2. Para la fluorescencia directa se obtiene la muestra de manera similar que la descrita para el campo oscuro, pero se deja secar al medio ambiente. También se puede trabajar esta técnica con muestras parafinadas de cualquier tejido, siendo las más frecuentes del cerebro,placenta, cordón umbilical y piel.
3. Para Western blot se trabaja con suero; y para la PCR con muestras sanguíneas, exudados y tejidos, para algunos el uso de suero o LCR es controversial. Al realizar la PCR el mayor problema, y lo que debe evitarse, es la contaminación de las muestras con ADN extraño.

PRUEBAS DE DIAGNÓSTICO NO SEROLÓGICAS
Microscopía de Campo Oscuro
La microscopía de campo oscuroes la prueba de elección para la sífilis primaria sintomática. Los treponemas, morfológicamente, son espiroquetas muy delgadas y helicoidales, que miden 0,1 por 5 a 15 mm; estos gérmenes son tan delgados, que no pueden ser observadas en un microscopio de luz a campo normal, y es necesario un microscopio que tenga campo oscuro. El T. pallidum se diferencia de otros microorganismos espiralados...