Montaje, extensión, tinción y determinación de formas bacterianas

Montaje, extensión, tinción y determinación de formas bacterianas
1Ordoñez-R, A; Tique, L & Zapata-L, A.
1Universidad de la Amazonia. Facultad de ciencias básicas. Estudiantes de Biología. Laboratorio de Microbiología
1aryamardnajelaz@gmail.com

Resumen
Se realizó el montaje, tinción y determinación de morfología bacteriana de cuatro muestras: amígdalas, zona interdental, líquido(sevillana) e impronta de corazón de ave; por frotis con tinción de Gram y posterior observación al microscopio. Así se identificaron bacilos Gram (+) y cocos que debido a una posible metodología incorrecta se observaron como Gram (-).
Palabras clave fijación, frotis, montaje, morfología bacteriana, tinción

Introducción
Como punto de partida, en microbiología es de transcendental importancia,tanto el manejo idóneo de materiales como tubos de ensayo, cajas de Petri, asas y demás utilizados en el laboratorio como su esterilización y desinfección, por ello, a la hora de realizar prácticas de microbiología los investigadores en formación deben tener en cuenta normas básicas de manejo y esterilización que les permitan realizar trabajos serios y reproducibles como la manera de agarrar lacaja de Petri, la forma de esterilizar las asa y dónde se debe mantener el material a trabajar (tubos en gradilla) (Figura 1).
Figura 1. Modo de sostener la caja de Petri, siempre cerca de un mechero, cómo esterilizar las asas y los tubos deben estar siempre en gradilla.

Debido alimperceptible tamaño de los microorganismos como las bacterias y la dificultad para observarlos detalladamente al microscopio óptico por la falta de contraste entre ellos (normalmente transparentes) y el medio que los rodea, se han ideado dos formas fundamentales de observación y examen microscópico de las bacterias, observando los microorganismos vivos sin teñir (de gota pendiente) y las célulasfijadas teñidas con colorantes (frotis o extensiones), para ello se deja secar la muestra al ambiente, se fija (coagulación del protoplasma) lo que se hace comúnmente por calor y se tiñe (Figura 2).

Figura 2. Forma de realizar una extensión para observación microscópica (Madigan et al; 2004)


La tinción más utilizada es la de Gram (Walker, T. S.2000) desarrollada en 1884 por Hans Christian Joachim Gram, basada en la reacción que presentan las paredes de los microorganismos con los componentes químicos de esta técnica, los microorganismos pueden ser grampositivos (se colorean de violeta) y gramnegativos (de color rosa); además de dicha diferenciación ésta permite apreciar las diferentes formas bacterianas.http://www.revistaciencias.com/publicaciones/EElpZEVkykPMncqxmd.php

Las bacterias gram (+) tienen una gruesa capa de péptidoglucano y gran cantidad de ácidos teicóicos que no son afectados por la decoloración con alcohol y/o acetona, reteniendo el colorante inicial acomplejado con iodo y visualizándose en distintos grados de tonos desde el violeta al azul claro, dependiendo de si la naturaleza de su pared celular está intactao dañada (por tratamientos antibióticos, edad celular…).
Las bacterias gram (–) tienen en su pared celular una delgada capa de peptidoglucano ligada a una membrana externa por moléculas de lipopolisacáridos. Esta membrana externa es dañada por el alcohol y/o acetona de la decoloración, permitiendo que el primer colorante acomplejado con iodo escape y sea reemplazado por el contracolorante.Clásicamente los reactivos utilizados para la realización de la tinción de Gram han sido el cristal violeta como colorante inicial, la solución de lugol para acomplejar a éste, el alcohol acetona para la decoloración y la safranina o fucsina básica como...