Neutralismo

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CURSO DE CULTIVOS CELULARES
Coordinadores:
Milagros Ramos Gómez
Alberto Martínez-Serrano

Universidad Autónoma de Madrid
Junio 2008.
Docentes (según calendario):
Alberto Martínez Serrano
Ignacio Tardieu
Juan Rebelles
Carmen Punzón
Angeles Sánchez
José Antonio López
Elena Rodríguez
Isabel Liste
Elena Holguín
Miguel Remacha
Milagros Ramos

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Contenido:
• Introducción ynormas de trabajo.
• Cultivo de células de mamíferos: aspectos básicos
• Funcionamiento y uso de aparatos generales de laboratorio de cultivos
•Lavado de material, esterilización y preparación de medios de cultivos celulares
•Microbiología:
Medios de cultivo, siembra y observación de microorganismos
• Virología:
Titulación de virus y transducción
• Células de insectos:
Generación deproteínas recombinantes mediante el uso de baculovirus
•Células de mamíferos:
Descongelación de líneas establecidas
Cultivos primarios de linfocitos de ratón
Células ES
Cultivos primarios neuronas de cerebro de ratón
• Células de plantas
• Seguridad Biológica

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INTRODUCCIÓN Y NORMAS DE TRABAJO.
Alberto Martínez Serrano
• Normas de trabajo
Laboratorio de cultivos
Es de extremaimportancia lavarse las manos antes, después, y frecuentemente durante el
trabajo en cultivos, para evitar contaminaciones en los experimentos, y contaminación del
usuario con material biológico, y posible diseminación de éste.
Se debe trabajar siempre con material estéril (pipetas, puntas, etc). El material estéril sólo
puede abrirse, lógicamente, dentro de la campana de cultivos, o a la llama delmechero.
Por defecto, todo aquello de lo que no se esté seguro al 100% de su esterilidad ha de ser
considerado como no estéril. “Asumir” que algo está estéril cuando no lo está supone, sin
ninguna duda, contaminar (esto es, destruir) el experimento. Se requiere de todos los
asistentes al curso un elevado grado de responsabilidad, para no arruinar el trabajo del grupo.
En caso de contaminaralgo involuntariamente (o incluso sospechar que ésto ha pasado), se
debe poner inmediatamente en conocimiento del profesor, para evitar males mayores.
Marcar siempre cualquier tubo o recipiente que contenga algo útil, de la forma más segura
posible, por ejemplo tanto en la tapa como en el tubo.
Marcar siempre las placas de cultivos en la tapa y en un lateral de la base, de manera distinta
paracada placa, para evitar intercambiar tapas.
Si se ha de pipetear repetidamente un stock de una solución (p.ej. botella con medio de
cultivo) es conveniente sacar de una vez la alícuota que se vaya a usar a una botella o tubo de
menor volumen, para disminuir el número de veces que se introducen pipetas en la botella
con el stock, y el consiguiente riesgo de contaminación.
Si faltasen cabinas decultivo para llevar a cabo todo el trabajo necesario, algunas partes de
los experimentos se harán en la mesa de laboratorio, previamente descontaminada con
hipoclorito, y trabajando en el ambiente estéril proporcionado por la llama del mechero.
• Seguridad biológica
Es obligatorio lavarse las manos después del trabajo de laboratorio, para evitar contaminación
del usuario con materialbiológico, y la potencial dispersión de éste.
Todo el material biológico, p. ej. células o material que haya estado en contacto con éstas, ha
de ser inactivado con hipoclorito antes de tirarlo.
Tanto el plástico desechable como el vidrio que haya estado en contacto con material
biológico ha de ser inactivado antes de tirarlo, o disponerlo para su lavado y esterilización.
Los residuos acumulados envasos de precipitados han de ser inactivados con hipoclorito
antes de tirarlos, y los vasos se dejarán con un poco de hipoclorito hasta su próximo uso.
La mesa de trabajo y las campanas se descontaminarán antes y después de trabajar con
material biológico. Cualquier material biológico derramado ha de ser descontaminado
inmediatamente con hipoclorito, antes de proceder a secar y lavar con...