Nutricion

Técnicas de separación de aminoácidos y péptidos

Cromatografía: método que permite separar sustancias
con propiedades fisicoquímicas semejantes.
Tipos

Fase móvil

Fase
estacionaria

Cromatografía en papel

Líquido

Sólido

Cromatografía en capa
fina

Líquido

Sólido

Cromatografía líquida
en fase inversa

Líquido
(polar)

Sólido o líquido
(menos polar)Cromatografía líquida
en fase normal

Líquido
(menos
polar)

Sólido o líquido
(polar)

Cromatografía líquida
de intercambio iónico

Líquido
(polar)

Sólido

Cromatografía líquida
de exclusión

Líquido

Sólido

Cromatografía líquida
de adsorción

Líquido

Sólido

Cromatografía de partición

Cromatografía de capa fina

Cromatografía Intercambio
iónico

Cromatografíalíquida

La secuencia de un péptido

La insulina bovina fue la primera proteína que se
secuenció completamente por Sanger en 1953, lo que
le valió el premio Nobel. La determinación de la
secuencia de la insulina fue el resultado del trabajo
de muchos científicos durante 10 años, desde
entonces se han secuenciado miles de proteínas.

Los pasos a seguir son:
Determinación de lacomposición del péptido por
hidrólisis total y posterior análisis cromatgráfico.
Determinación de los extremos C-terminal y Nterminal
Fragmentación por hidrólisis selectiva
Secuenciación: Degradación de Edman

La determinación de la composición del péptido
se realiza por hidrólisis total presencia de HCl 6N,

calentando a 100 °C durante 10-24h, y en tubo al
que se le ha hecho el vacío.Tras el proceso se
utiliza un sistema cromatográfico que permita
separar y determinar cuántos y cuáles son los
aminoácidos que forman la cadena.

La hidrólisis ácida destruye:
Tri, Cis y si hay presencia de iones metálicos se
pierde algo de Met y Tir.
La recuperación de Tre y Ser es incompleta
La hidróliis básica destruye:
Ser, Tre, Arg y Cis

Se protege Tri

· La determinación delos extremos Cterminal y N-terminal.
Hay métodos que permiten determinar el
primer aminoácido (Resto N- terminal) o el
último (Resto C- terminal) de una cadena
polipeptídica.
Método de Sanger (1-fluoro-2,4 dinitrobenceno)

Degradación de Edman (fenil isiotiocianato)

Fragmentación por hidrólisis parcial
Es necesaria porque por lo general no pueden
secuenciarse péptidos con mas de 20 o30 aminoácidos.
Se realiza con reactivos selectivos (en la mayoría de los
casos proteasas) que hidrolizan determinados enlaces
peptídicos.
La tripsina hidroliza por la derecha de Arg , Lis
La quimotripsina hidroliza por la derecha de Fen, Tri,
Tir
La pepsina hidroliza por la izquierda de Fen, Tri, Tir
El bromuro de cianógeno (BrCN) hidroliza por el
extremo carboxilo

CONCEPTO DEPROTEÍNA
Las proteínas son biomóleculas o macromóleculas
formadas básicamente por carbono, hidrógeno, oxígeno
y nitrógeno. Pueden además contener azufre y en
algunos tipos de proteínas, fósforo, hierro, magnesio y
cobre entre otros elementos.
Pueden considerarse polímeros de unas pequeñas
moléculas que reciben el nombre de aminoácidos y
serían por tanto los monómeros unidad.

Estos monómerospresentan un grupo
carboxilo (– COOH) y un grupo amino (– NH2),
dispuestos en secuencias lineales, que se
combinan (en forma semejante a las letras al
formar palabras) para formar toda clase de
proteínas. Existen veinte tipos de aá, los que
universalmente se encuentran en todos los
organismos.

Las proteínas son macromoléculas compuestas
por unidades de alfa –aminoácidos que se unenentre sí mediante enlaces petídicos y que
alcanzan un peso molecular igual o superior a
5000 D.

ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS
La organización de una proteína viene definida
por cuatro niveles estructurales denominados:
Estructura primaria
Estructura secundaria
Estructura terciaria
Estructura cuaternaria
Cada una de estas estructuras informa de la
disposición de la anterior en el...