Nutricion
Páginas: 6 (1373 palabras)
Publicado: 26 de febrero de 2013
TECNOLOGIA DEL DNA RECOMBINANTE
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
¿Por que es tan importante que podamos aislar genes individuales?
Nos permite determinar su secuencia nucleotídica y con ello: • Comparar ADN de diferentes genes y obtener información sobre su evolución. •Estudiar las funciones de los genes. •Trasladar un gen de un organismo a otro y obtener organismos TRANSGENICOSGENETICA BASICA Y APLICADA 2008
CONSTRUCCION DEL ADN RECOMBINANTE
ORGANISMO DONANTE EXTRACCION DE ADN
VECTORES ADN RECOMBINANTE BACTERIA CLON DE ADN
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
La clonación permite la amplificación de un fragmento especifico de ADN a partir de una muestra compleja de ADN como por ejemplo un genoma
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Aislamiento del ADN
(donante yvector)
Otro protocolo utiliza pH alcalino que desnaturaliza DNA geonómico y luego cuando se neutraliza la muestra el geonómico precipita.
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Digestión del ADN
Enzimas de restricción:
•Cortan en secuencias diana especificas •La mayoría reconoce y corta palíndromes específicos Ej. EcoRI •Muchas producen cortes escalonados que generan extremos cohesivos decadena sencilla que permiten la formación de ADN recombinante.
• Los cortes limpios generaran extremos romos que también nos permiten construir ADN recombinante
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Formación de una molécula de ADN recombinante 1) y 2) Algunas secuencias del ADN son reconocidas por enzimas de restricción que lo cortan en fragmentos. 3) Unfragmento de ADN proveniente de otra fuente es agregado y se aparea con los fragmentos mediante complementación de las hebras. 4) La enzima ADN ligasa une covalentemente las hebras dejándolas continuas]
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Ligación del ADN
•DNA donante y DNA vector se digieren con la misma enzima y luego se colocan juntos en presencia de DNA Ligasa
GENETICA BASICA Y APLICADA2008
Amplificación del ADN recombinante
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Elijo vector de clonación:
Características básicas: Pequeños, capaces de proliferar en células vivas, con sitios de restricción compatibles con el DNA a clonar, mecanismo de identificación y recuperación de recombinantes. PLASMIDOS : Son portadores de resistencia a antibióticos, selección de células transformadas ytambién portadoras del gen de interés. Fragmentos de ADN menores a 20kb. Figura: pBR322 Y pUC18 VECTORES VIRALES: Fago Lambda:λ permite insertar fragmentos de mayor tamaño hasta 50kb. COSMIDOS: híbridos entre Fago lambda y un plasmido, tambien permiten fragmentos de mayor tamaño. VECTORES DE EXPRESION: genes expresados dan productos proteicos.
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
GENETICA BASICAY APLICADA 2008
Construcción de una genoteca:
Tomamos ADN geonómico y hacemos una colección de clones. De acuerdo al tamaño de los fragmentos obtenidos será la elección del vector. Puede ser una genoteca: GENOMICA o de DNAc (obtenido a partir de ARNm) si quiero aislar un gen en particular lo busco en el tejido donde se esta expresando. Por medio de sondas complementarias marcadasradiactivamente. (darán una mancha en un auto radiograma) se pueden identificar los fragmentos dentro de la genoteca.
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Aplicaciones del ADN clonado:
Utilización del ADN clonado como sonda para identificar el ac. nucleico especifico en una muestra: Técnica de Southern: Digestión de ADN con enzimas de restricción /electroforesis/ manchadifusa/ utilización de sonda para identificar los fragmentos.
ELECTROFORESIS: Permite separar ácidos nucleicos o proteínas de acuerdo a su tamaño en geles sometidos a un campo eléctrico. (las muestras se depositan cerca del cátodo y migran hacia el ánodo)
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Separación de fragmentos. Membrana absorbente sobre el gel, transferencia de bandas. Se sumerge la...
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
¿Por que es tan importante que podamos aislar genes individuales?
Nos permite determinar su secuencia nucleotídica y con ello: • Comparar ADN de diferentes genes y obtener información sobre su evolución. •Estudiar las funciones de los genes. •Trasladar un gen de un organismo a otro y obtener organismos TRANSGENICOSGENETICA BASICA Y APLICADA 2008
CONSTRUCCION DEL ADN RECOMBINANTE
ORGANISMO DONANTE EXTRACCION DE ADN
VECTORES ADN RECOMBINANTE BACTERIA CLON DE ADN
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
La clonación permite la amplificación de un fragmento especifico de ADN a partir de una muestra compleja de ADN como por ejemplo un genoma
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Aislamiento del ADN
(donante yvector)
Otro protocolo utiliza pH alcalino que desnaturaliza DNA geonómico y luego cuando se neutraliza la muestra el geonómico precipita.
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Digestión del ADN
Enzimas de restricción:
•Cortan en secuencias diana especificas •La mayoría reconoce y corta palíndromes específicos Ej. EcoRI •Muchas producen cortes escalonados que generan extremos cohesivos decadena sencilla que permiten la formación de ADN recombinante.
• Los cortes limpios generaran extremos romos que también nos permiten construir ADN recombinante
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Formación de una molécula de ADN recombinante 1) y 2) Algunas secuencias del ADN son reconocidas por enzimas de restricción que lo cortan en fragmentos. 3) Unfragmento de ADN proveniente de otra fuente es agregado y se aparea con los fragmentos mediante complementación de las hebras. 4) La enzima ADN ligasa une covalentemente las hebras dejándolas continuas]
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Ligación del ADN
•DNA donante y DNA vector se digieren con la misma enzima y luego se colocan juntos en presencia de DNA Ligasa
GENETICA BASICA Y APLICADA2008
Amplificación del ADN recombinante
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Elijo vector de clonación:
Características básicas: Pequeños, capaces de proliferar en células vivas, con sitios de restricción compatibles con el DNA a clonar, mecanismo de identificación y recuperación de recombinantes. PLASMIDOS : Son portadores de resistencia a antibióticos, selección de células transformadas ytambién portadoras del gen de interés. Fragmentos de ADN menores a 20kb. Figura: pBR322 Y pUC18 VECTORES VIRALES: Fago Lambda:λ permite insertar fragmentos de mayor tamaño hasta 50kb. COSMIDOS: híbridos entre Fago lambda y un plasmido, tambien permiten fragmentos de mayor tamaño. VECTORES DE EXPRESION: genes expresados dan productos proteicos.
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
GENETICA BASICAY APLICADA 2008
Construcción de una genoteca:
Tomamos ADN geonómico y hacemos una colección de clones. De acuerdo al tamaño de los fragmentos obtenidos será la elección del vector. Puede ser una genoteca: GENOMICA o de DNAc (obtenido a partir de ARNm) si quiero aislar un gen en particular lo busco en el tejido donde se esta expresando. Por medio de sondas complementarias marcadasradiactivamente. (darán una mancha en un auto radiograma) se pueden identificar los fragmentos dentro de la genoteca.
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Aplicaciones del ADN clonado:
Utilización del ADN clonado como sonda para identificar el ac. nucleico especifico en una muestra: Técnica de Southern: Digestión de ADN con enzimas de restricción /electroforesis/ manchadifusa/ utilización de sonda para identificar los fragmentos.
ELECTROFORESIS: Permite separar ácidos nucleicos o proteínas de acuerdo a su tamaño en geles sometidos a un campo eléctrico. (las muestras se depositan cerca del cátodo y migran hacia el ánodo)
GENETICA BASICA Y APLICADA 2008
Separación de fragmentos. Membrana absorbente sobre el gel, transferencia de bandas. Se sumerge la...
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