Obtencion del piruvato de la glucosa

UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO
FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERIA EN ALIMENTOS & BIOQUÍMICA
LABORATORIO DE INGENIERÍA DE LAS FERMENTACIONES
CARRERA DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA

PROFESOR: Ing. Cecilia Carpio
AYUDANTE: Egda. Valeria Criollo Peralta
CURSO: 7 BQ
FECHA: 17/01/2011
Nombre: Isaác Molina

TEMA: “OBTENCIÓN DE GLUCOAMILASA EN SISTEMA CONTINUO (QUIMIOSTATO)”

INTRODUCCIÓN

Elquimiostato es un dispositivo de cultivo continuo en el cual tanto la densidad de la población como el ritmo de crecimiento son controlados por el investigador. Para la regulación del quimiostato se utilizan dos elementos: el ritmo de flujo y la concentración de un nutriente limitante, como una fuente de carbono, de energía o de nitrógeno, o factor de crecimiento. Tal como a concentraciones bajasde un nutriente es rápidamente consumido por el crecimiento. En los cultivos estáticos el crecimiento es proporcional a la concentración de dicho nutriente. Sin embargo a estas bajas concentraciones el nutriente se ha consumido, pero en el quimiostato la adición continua de medio fresco que contiene el nutriente limitante permite el crecimiento continuo. Puesto que a bajos niveles de nutrientesutilizados el nutriente limitante es rápidamente asimilado, su concentración en el quimiostato es siempre cero.

Los quimiostatos han encontrado aplicación en una gran variedad de procedimientos de investigación, especialmente en los casos en que se desea las poblaciones naturales a menudo crecen lentamente o a concentraciones bajas de nutriente, los quimiostatos han sido especialmente útiles comomodelos de laboratorio de ecosistemas microbianos naturales .

El hongo filamentoso A. niger ha sido usado por décadas en la producción de glucoamilasas, y algunas cepas industriales dan rendimientos sobre 20 g/L de glucoamilasas en cultivos por lote alimentado mientras que la producción de glucoamilasa en A. niger ha sido estudiada en quimiostatos limitados en carbono, en frascos agitados y encultivos reciclados donde se ha encontrado que para algunas cepas la maltosa es superior a la glucosa para la producción de glucoamilasas, mientras que para otras cepas no hubo diferencia entre las dos fuentes de carbono.

Puesto que muchas enzimas están sujetas a represión catabólica por carbono, los cultivos por lote alimentado y quimiostato limitados en carbono pueden ser usados para crecerel hongo a bajas concentraciones (4).

OBJETIVOS

General:

* Obtener glucoamilasa en un sistema continuo (quimiostato) a partir de Aspergillus niger.

Específicos:

* Identificar las ventajas y desventajas de la obtención de glucoamilasa al trabajar con un sistema continuo.

* Calcular la cantidad de azúcares y las unidades de glucoamilasa producidas por Aspergillus niger.PROCEDIMIENTO

CÁLCULOS Y RESULTADOS

Tabla 1. Estándares para elaborar la curva de calibración
Tubo N° | Vol. Gluc.ml P gluc.mg | Volumen H2O (ml) | Peso Total (g) | Concentración (mg/g) | Absorbancia λ = 540 nm |
0 | 0.0 | 0.5 | 0.5235 | 0 | 0 |
1 | 0.0925 | 0.4 | 0.4976 | 0.187 | 0.092 |
2 | 0.1973 | 0.3 | 0.5086 | 0.39 | 0.208 |
3 | 0.2925 | 0.2 | 0.5119 | 0.575 | 0.337 |
4| 0.3815 | 0.1 | 0.5048 | 0.76 | 0.437 |
5 | 0.4983 | 0.0 | 0.4983 | 1.005 | 0.581 |
Fuente: Lab. de Microbiología Industrial

Grafico 1. Curva de calibración de la glucosa

Fuente: Lab. de Microbiología Industrial

CONCENTRACIÓN DE GLUCOSA

Tabla 2. Absorbancia a un tiempo determinado y su respectiva concentración de glucosa
Tiempo (min) | Absorbancia | Promedio | Concentración(mg glucosa/g solución) |
5 | 0.007 | 0.0067 | 0.027 |
| 0.009 | | |
| 0.004 | | |
Fuente: Lab. de Ingeniería de las Fermentaciones
y = 0,587x - 0,009

x= y+0,0090,587

x= 0,0067+0,0090,587

x= 0,027 mg glucosa/g solución

FACTOR DE DILUCIÓN “D”

D= FV

D= 0,12 L/h2 L

D= 0,06 h-1

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Grafico 2. Tiempo vs Concentración de glucosa

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