Organica
La prueba ANA es una técnica de detección enzimática indirecta de anticuerpos que evalúa la unión específica de los autoanticuerpos a estructurasespecíficas en los núcleos de las células.
Materiales y Procedimiento
1. Preparación de las laminillas
- Colocamos los sueros de control (Ab primario) en los pocillos para los controles
-Invertimos el envase cuentagotas del control y apretamos hasta que se vio una gota en la punta y despacio tocamos el pocillo de la laminilla con la gota.
- Aplicamos 25 µl de cada una de lasdiluciones del desconocido en cada uno de los pocillos restantes en la laminilla .
2. Incubación de laminillas
- Pusimos las laminillas en una cámara cubierta e húmeda y incubamos por 30 minutos atemperatura ambiente.
3. Enjuague 1 con solución amortiguadora de fosfatos (PBS)
- Sacamos la laminilla y mojamos los pocillos rápidamente con PBS usando la pipeta de Pasteur. La solución salinaamortiguadora de fosfato (PBS) constituye una solución amortiguadora de ph. Esta solución se prepara a partir de cloruro de sodio, fosfato de sodio y en algunas formulaciones, con fosfato de potasio.4. Lavado 1 con PBS
- Pusimos las laminillas en un recipiente de tinción de laminillas por un periodo de 15 minutos y descartamos el PBS luego del lavado.
5. Anticuerpo Conjugado (Absecundario)
- Retiramos la laminilla de PBS y mojamos de 3 a 5 veces con agua destilada
- Golpeamos la laminilla delicadamente por un lado con papel para secar y retiramos el exceso de agua.
-Colocamos rápidamente la laminilla en la cámara de incubación y tapamos los pocillos totalmente con el anticuerpo conjugado.
6. Incubación de laminillas
- Colocamos la laminilla en la cámarahúmeda y incubamos por un periodo de 30 minutos a temperatura ambiente (18-24°C).
7. Enjuague 2 con PBS
- Retiramos la laminilla y la mojamos rápidamente con PBS utilizando una pipeta de...
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