Practicas de biotecnologia

Prácticas de Biotecnología

P1.

OBTENCIÓN DE PROTEÍNAS.

Objetivo: Hacer prácticos todos los conocimientos adquiridos en cuanto a la obtención de proteínas a partir de muestras naturales. Fundamento: Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas a temperaturassuperiores a los 70ºC o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, enzimas, plantas, sustancias caotrópicas, etc. La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes indicados, que al actuar sobre la proteína la desordenan por la destrucción de su estructura terciaria y cuaternaria. Otras técnicas alternativas a la coagulaciónson el intercambio iónico y la micro y ultrafiltración.

Material: Mechero. Tubos de ensayo. Tubos de centrífuga. Vasos de precipitados. Pipetas de 10 mL. Pipetas de Pasteur. Espátula. Placa calefactora. Centrifugadora.

Reactivos: Muestras: Procedimientos:
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Ácido acético.

Huevo. Leche

OBTENCIÓN DE OVOALBÚMINA. OBTENCIÓN DEL SUERO LÁCTICO.

Salvador Camacho Garrido

1Prácticas de Biotecnología

OBTENCIÓN DE OVOALBÚMINA: 1. De un huevo de gallina separa la yema y preserva la clara 1 . 2. Añade agua destilada y agita hasta que aún quede una mezcla espesa. 3. Coloca en un tubo de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo. 4. Añadir 5 gotas de ácido acético y calentar el tubo a la llama del mechero 2 . 5. Agita hasta obtener una disolución homogénea. Caso de queexistan flóculos, eliminarlos mediante centrifugación a 4000 rpm durante 5 min. Con ello se obtiene una disolución de aprox. 5 mg/ml de proteína 3 . 6. Preserva tanto las aguas madres como el centrifugado a temperatura de refrigeración en sendos tubos de ensayo.

OBTENCIÓN DEL SUERO LÁCTICO: 1. 2. 3. 4. Toma unos 10 ml de leche. Calienta al baño maría. Añade 1 ml de ácido acético. Agitandocontinuamente. Se forma un precipitado que contiene la caseína 4 y la grasa quedando en disolución 5 , los glúcidos, las sales y las proteínas solubles 6 . 5. Centrifuga. 6. Preserva tanto las aguas madres como el centrifugado a temperatura de refrigeración en sendos tubos de ensayo.

De esa cantidad, el 10% aprox. es ovoalbúmina, la proteína mas abundante en la clara. 2 De forma alternativa, de unaclara de huevo de gallina, toma entre 1-2 g con la ayuda de una espátula o una pipeta Pasteur. Diluye 20 veces con tampón fosfato. 3 Caso de suministrar una disolución de albúmina de 5 mg/ml, no es necesario realizar la extracción. 4 Fosfoprotéina insoluble. 5 Se denomina suero lácteo. 6 Lactoalbúmina e inmunoglobulinas. Salvador Camacho Garrido

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P2.RECONOCIMIENTO DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS.

Objetivo: Hacer prácticos todos los conocimientos adquiridos en cuanto a la determinación cualitativa de aminoácidos, péptidos y proteínas a partir de muestras naturales. Fundamento: Los aminoácidos pueden detectarse con reactivos que reaccionen con sus grupos característicos, el carboxilo, el amino u otros de la cadena lateral. Aunque el número deensayos es muy grande, uno de los más utilizados es la detección con ninhidrina, que produce un color púrpura que en algunos casos puede ser rosa o rojizo. Si partimos de proteínas debemos hidrolizarla. La hidrólisis puede ser ácida (HCl 6N/90ºC/18 h), básica y enzimática. La reacción del Biuret la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlacepeptídico (-CO-NH-) que se destruye al liberarse los aminoácidos. Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, que en contacto con una solución de sulfato cúprico diluida, da una coloración violeta característica.

La reacción xantoprotéica es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo,...