Purificación De Proteinas

Trabajo de investigación bibliográfica

4QM1

IPN
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

CRESPO TORRES JORGE BRUNO

Purificación de proteínas

Purificación de proteínas
El bioquímico, cuando intenta comprender los procesos químicos en las células y los organismos, se enfrentan a un enorme reto. La purificación es un paso casi obligatorio en el estudio de macromoléculas, pero no esnecesariamente fácil. Normalmente, una sustancia que hace que un 0,1% de un tejido el peso en seco deben ser llevados a la pureza del 98%.
La tarea de purificar una proteína presente en pequeñas cantidades sólo una vez fue tan ardua que muchas de las primeras proteínas que se caracterizan fueron estudiadas en parte debido a que son abundantes y aislados fácilmente. Por ejemplo, la hemoglobina, querepresenta alrededor de un tercio del peso de las células rojas de la sangre, ha sido históricamente entre las proteínas más ampliamente estudiados. La mayoría de las enzimas que median los procesos metabólicos básicos o que están implicados en la expresión y la transmisión de la información genética son comunes a todas las especies. Por esta razón, una proteína dada es frecuentemente obtenida deuna fuente elegido principalmente por conveniencia, por ejemplo, los tejidos de animales domesticados o microorganismos obtenidos fácilmente tales como Escherichia coli y Saccharomyces cerevisiae (levadura de Baker).

Pasos para la purificación de las proteínas.
El primer pasó en el aislamiento de una proteína o molécula biológica otra es para sacarlo de la célula y en la solución. Muchascélulas requieren algún tipo de rotura mecánica para liberar su contenido. La mayoría de los procedimientos para la lisis de células utilizar alguna variación de triturar o moler seguido por filtración o centrifugación para eliminar grandes partículas insolubles. Si la proteína diana está estrechamente asociado con una membrana lipídica, detergente o un disolvente orgánico puede ser utilizado parasolubilizar los lípidos y recuperar la proteína.
pH, temperatura y otras condiciones deben ser controladas para mantener las proteínas estable. Una vez que una proteína se ha eliminado de su entorno natural, se convierte en lo expuesto a muchos agentes que pueden dañarla irreversiblemente. Estas influencias deben ser cuidadosamente controladas en todas las etapas de un proceso de purificación. Lossiguientes factores deben ser considerados:
1. pH. Los materiales biológicos son rutinariamente disueltos en soluciones tampón eficaz en el intervalo de pH para el que los materiales son estables. De no hacerlo, podría provocar su desnaturalización (alteración estructural), si no su degradación química.

2. Temperatura. La estabilidad térmica de proteínas varía. Aunque algunas proteínas sedesnaturalizan a bajas temperaturas, la mayoría desnaturalizar las proteínas a altas temperaturas, a veces sólo unos pocos grados por encima de su entorno nativo. Purificación de proteínas se lleva a cabo normalmente a temperaturas cercanas a 0 °C.
3. La presencia de enzimas degradadoras. La destrucción de los tejidos para liberar la molécula de interés también libera enzimas degradativas, incluyendoproteasas y nucleasas. Enzimas degradativas puede ser inhibida por el ajuste del pH o la temperatura a los valores que los inactivan (siempre que éste no afecte adversamente a la proteína de interés) o mediante la adición de compuestos que bloquean específicamente su acción.
4. La adsorción a las superficies. Muchas proteínas son desnaturalizadas por el contacto con la interfase aire-agua o consuperficies de vidrio o plástico. Por lo tanto, las soluciones de proteínas se manejan a fin de minimizar la formación de espuma y se mantienen relativamente concentrados.
5. Almacenamiento a largo plazo. Todos los factores mencionados anteriormente deben ser considerados cuando una muestra de proteína purificada es que se mantiene estable. Además, los procesos tales como la oxidación lenta y...