Tecnica

TEMA: EVALUACION DE LA INTENSIDAD DE REACCION PARA ANTISUEROS UTILIZADOS EN LA EVALUACION ANTIGENICA DEL SISTEMA Rh
MATERIAL
1. Rotulador de vidrio
2. Gradillas.
3. Tubos deensayo
4. Pipetas graduadas de 50 ul y 100 ul
7. Un baño de agua/ termobloque o baño seco
8. Una centrífuga.
9. Cronometro
REACTIVOS
1. Antisuero ANTI-D
2. Antisuero CDE

MEDIOS DE SUSPENSIÓN• Solución salina isotónica
PROCEDIMIENTO:
Para la muestra:
 Se seleccionara sangre del Grupo O Factor RhD positivo.
 Se lavara y suspenderá (1 en 20).
 Utilizar, guía de práctica, técnica deltema Lavado suspensión de células.
Recomendación: se utilizara un tubo control en el que se añade 100 ul de albumina bovina con 50 ul de células lavadas y suspendidas.
Para la valoración de laintensidad de reacción
1. Rotular 8 tubos, asegurase en escoger tubos limpios (nuevos)
2. A cada tubo se añade 2 gotas de albumina bovina (22%)
3. Al tubo 1 se le añade 2 gotas de Anti-D (relación 1 a1)
4. Del tubo 1 (volumen de 200 ul) homogenizar y dispensar al tubo 2 (100 ul) relación dos a uno.
5. Del paso 4 vamos homogenizando y dispensando 100 ul, hasta llegar al tubo 8 de estedesechamos 100 ul, hasta lograr una dilución final en el tubo 8 de 1/128.
6. Se añade a los tubos 1, 2, 3…………hasta el 8 50 ul de células lavadas y suspendidas.
7. Incubar 30 minutos
8. Centrifugar(controlar velocidad y revoluciones)
9. Leer resultados de aglutinación (intensidad de reacción 4, 3, 2 , 1 cruz)
10. La intensidad de reacción optima es de 4+ hasta la suspensión 1/32 (tubo 6), estoimplica que el reactivo evaluado puede ser utilizado, sobre todo para evaluar a los RhD débiles ( Du positivos)
11. Puede seguir manteniendo reacción de hemaglutinación en tubos 7, 8 pero su intensidadserá menor a 4+

ESQUEMA DE INTENSIDAD DE LA REACCION



Numero de los Tubos 1 2 3 4 5 6 7 8 C
Al. Bovina 22% 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul...