Tecnicas de estudio de proteinas

TECNICAS DE ESTUDIO DE PROTEINAS

PURIFICACION DE PROTEINAS
Para poder comenzar con el estudio de proteinas es necesario tener una muestra homogenea que solo tenga moleculas de un tipo. Para separar las moleculas, los metodos de separacion utilizan el tamano, la carga y la polaridad de las mismas. Ademas de separar las moleculas, se aplican tecnicas para eliminar contaminantes y obtener unamuestra pura de la proteina que se busca.

AISLAMIENTO DE PROTEINAS DE CELULAS
Para poder estudiar las proteinas es necesario extraerlas de la celula. Para esto se realizan los siguientes pasos:
- Homogeneizacion: es la ruptura de la celula. Se muele el tejido en una liquadora y luego se usa el homogeneizador potter-elvejhem.
- Centrifugacion diferencial: la muestra se hace girar a unas 500veces la fuerza de la gravedad. La velocidad en la que la muestra es centrifugada depende de la proteina que se desea obtener para la investigacion.
- Precipitacion por sales: despues de solubilizada, la mezcla es sometida a una purificacion bruda, comunmente hecha con el sulfato de amonio. Cuando esto sucede, una parte del agua forma enlaces ion-dipolo con la sal. Las proteinas comienzan a crearenlaces hidrofobicos a medida que la concentracion de agua disminuye, asi se forma un precipitado con las proteinas contaminantes, que son luego centrifugadas y desechadas. Asi se vuelve a anadir sal hasta que se precipita un grupo diferente de proteinas, hasta obtener la proteina deseada.


METODOS DE ESTUDIO
1. CROMATOGRAFIA
Uno de los métodos mas usados para la separación de proteínas es laCromatografia se toma la muestra donde se contienen las proteínas y se ponen en un papel se les agregan disolventes y se espera a que las proteínas que son afines con el solvente se disuelvan y las que no son tan afines tardan mas en disolverse lo que aleja las partículas y permite diferenciar la muestra, posteriormente de que las separa les agregan tinción para poder observarlas la Cromatografíatiene diferentes tipos :
1.1 Cromatografia de Filtracion en Gel
Es util para ordenar proteinas con pesos moleculares variados. Este tipo de cromatografia consiste en particulas de gel que forman enlaces cruzados, estan en forma de granulado y consisten en uno o dos tipos de polimeros. Estos polimeros pueden ser, uno de carbohidrato y el segundo puede ser una poliacrilamida. La estructura de losenlaces cruzados creados por estos polimeros crea poros en el material.
Las moleculas pequenas penetran en los pequanos conductos que presentanlas bolas de gel, donde la velocidad de flujo de solvente es menor. Las moleculas grnades, incapaces de penetrar en los pequenos conductos de las bolas de gel se mueven entre ellas, donde la velocidad de flujo de solvente es mayor.
Como consecuencia,las moleculas de mayor peso molecular son eluidas antes que las de menor peso molecular.
1.2 Cromatografia por Afinidad
En este tipo de Cromatografia, se usa un material polimerico como fase estacionaria, que esta unido por enlaces covalentes con algun compuesto, llamado ligando, este se une a la proteina deseada.
En una columna se une la proteina deseada, mientras que el resto de proteinas seeluyen con un amortiguador.
1.3 Cromatografia de Columna
Se basa en el hecho de que diferentes compuestos pueden distribuirse en distinto grado entre diferente fase, o porciones separables de materia, se compone de 2 fases, estacionaria y la móvil, que esta fluye sobre el material estacionario y se lleva consigo la muestra a separar.
El material que se constituye en la fase estacionaria se empacaen una columna, la fase móvil se pasa a través de la columna.
Luego de esto se van recibiendo las diferentes proteinas en distintos recipientes.

2. ELECTROFORESIS
Las proteínas suelen tener cargas positivas o negativas netas que corresponden a su vez a la carga de sus aminoácidos, si se aplica una carga a una solución que contiene una proteína la proteína se desplazara y su velocidad de...