Tinciones

INTRODUCCIÓN
La morfología bacteriana puede ser estudiada de dos formas distintas:
1) Por visualización de los microorganismos vivos sin teñir, lo que nos permitir además observar su posible movilidad.
2) Por visualización de los microorganismos teñidos mediante colorante con una concentración tal que hace morir a la bacteria y no permiten observar su movilidad, pero sin embargo semejora notablemente la visualización de su morfología y otras estructuras según el tipo de tinción llevada a cabo.
En general todas las bacterias vivas son prácticamente incoloras, no presentando suficiente contraste con el medio acuoso donde se encuentran suspendidas, con lo cual no pueden ser observadas con claridad. Pero si se tiñen se produce un gran contraste con respecto al medio que lasrodea. Además, alguno de estos colorantes pueden también teñir estructuras internas de las bacterias, lo que nos sirve para su identificación
Por todo esto, las principales ventajas de las técnicas de tinción son:
* Observar más adecuadamente su morfología.
* Proporcionar el contraste preciso y suficiente en cada caso, lo que permitirá diferenciar distintos tipos morfológicos.
*Establecer una información complementaria sobre sus estructuras internas y/o externas que no podían ser observadas por examen en fresco.
* Conocer sus características tinto riales orientándonos hacia un grupo taxonómico u otro en la clasificación bacteriana.

FACTORES QUE AFECTAN A TODA TECNICA DE TINCIÓN
En general, las técnicas de tinción son imprescindibles para el estudio microbiológico de lasbacterias, constituyendo el primer paso en el examen bacteriológico que, para completarse y conducir a la identificación, precisa de otras técnicas complementarias de identificación como, por ejemplo, las pruebas bioquímicas.
Las técnicas de coloración, como primer paso, constituyen una práctica diaria en el laboratorio de microbiología, por lo que se deberá considerar que son muchos losfactores que pueden alterar los resultados obtenidos en toda técnica de tinción.
Así pues, los principales factores que pueden afectar a una tinción son:
* Pureza de colorantes: a mayor grado de impurezas, mayo error, y menor calidad en la tinción.
* Concentración de colorantes: a mayor concentración, mayor error en la tinción, igual que a menor concentración. Los valores ideales oscilan entre0,2 y 2%.
* El pH del colorante: este factor es elemental para realizar una tinción adecuada, ya que según sea el pH del colorante hace que este se fije o no a determinadas estructuras del microorganismo, permitiéndonos distinguir unos gérmenes de otros.
* Conservación del colorante: que deberá ubicarse siempre en lugares frescos, secos y oscuros, adecuadamente envasados y etiquetados.* Elaboración: aunque en muchos casos estos colorantes ya vienen preparados, generalmente dicha elaboración se lleva a cabo a través de soluciones acuosas o hidroalcohólicas a partir de polvo de colorantes en las cantidades precisas que permitan su solubilidad.
* Técnicas empleadas: se deberá ser escrupuloso a la hora de realizar una tinción; por ejemplo, los portaobjetos y cubreobjetosdeberán estar siempre limpios y desengrasados, nunca se mezclaran unos colorantes con otros, se seguirá rigurosamente paso a paso cada técnica de coloración, etc.
* Temperatura: se aplicara en cada técnica, según se precise, el colorante a la temperatura adecuada, que en muchos casos será temperatura ambiente aunque en otros se requerirá de temperaturas altas para facilitar la penetración delcolorante a ciertas estructuras bacterianas como, por ejemplo, con la tinción de esporas con el verde de malaquita.
* Cantidad de muestra: deberá ser representativa y homogénea pero en ningún caso muy grande, porque se apelotona y no se visualiza el microorganismo, ni tampoco demasiado pequeña, porque se corre el riesgo de no observar nada
* Realizar correctamente el frotis: si se...