Transformacion genetica














INFORME LAB.DE BIOLOGIA BIO-133
PRACTICO N°10 – TRANSFORMACION GENICA








Camilo Villalobos
Sebastián Araya

Pamela Lüttges
Andrea Tapia
Fecha: 26/06/2014

Introducción

Desde hace mucho tiempo, la rama de la biotecnología se ha encargado, entre otras cosas, de aplicar técnicas de ingeniería genética y de biología celular como apoyo almejoramiento genético de bacterias, celulas vegetales y animales para distintos fines. En estas manipulaciones genéticas son claves los métodos que se utilizan donde a predominado la Ingeniería genética.
La ingeniería genética, en pocas palabras, son series de técnicas que permiten la transferencia de genes de distintos organismos a otros. Se reúnen artificialmente secuencias de DNA, para extraer genesdeseados y replicarlos (con la misma técnica del PCR) e introducirlos en un genoma de un organismo para expresarlos en su fenotipo. Una técnica icono de la ingeniería genética para esta transferencia de genes es la Transformación genética.
La Transformación genética es el proceso en el cual células captan el DNA presente en su medio, algunas células lo hacen de manera natural y por lo tantocontribuye directamente a la adaptación al medio y su sobrevivencia. Para que esta transformación tenga lugar, esta célula debe encontrarse en el llamado “estado de competencia”, en este estado la célula presenta alteraciones en su membrana, que permiten la entrada de los genes deseados. Hay muchas formas de que se realice la transformación genética, como la transducción, recombinación, conjugación etc.Este último es que se usará en este práctico, que tiene que ver con la transferencia de genes de plásmidos, generalmente es el plasmado F que codifica su propia transferencia hacia células que carecen de él y se denomina plasmado conjugativo.
Las bacterias poseen naturalmente pequeños fragmentos de DNA circulares llamados plasmidios, estos contienen genes beneficiosos para la sobrevivencia de labacteria y son los fragmentos que se ingresan a otras bacterias para la transformación natural genética.




Muchas bacterias son utilizadas como sujetos de prueba para la transformación genética, como por ejemplo la E. coli. Esta bacteria no presenta el estado de competencia para recibir los genes e incorporarlos a su genoma, por lo tanto en el laboratorio se debe inducir a este estado decompetencia de la bacterias con diversos métodos como célula (aplicación de pulsos eléctrico breve e intenso), tratamientos químicos con sustancias como el cloruro de calcio o el “shock térmico” (exposición de la célula a una temperatura elevada).
En este práctico utilizaremos un gen que codifica para una proteína que presenta la fluorescencia verde (GFP). Este gen proviene es la medusa Aequoreavictoria, descubierto los años 60 por Osamu Shimomura y sus colaboradores y aislado y clonado el año 1992 por Douglas Prasher y sus colaboradores. Este gen produce una proteína que a exposición con la luz UV brilla de color verde. El plásmido a utilizar será el pGLO que codifica para el gen GFP y, además, para un gen que entrega resistencia al antibiótico ampicilina. El gen GFP se activa gracias auna azúcar llamada arabinosa (araC) y que sirve como regulador que se agregara donde se cultivaran estas células. La ampicilina se agregara también al cultivo para eliminar las células que no fueron modificadas con el gen de resistencia a este antibiótico con el fin de dejar solo las células que fueron modificadas con el gen pGLO












Objetivos del práctico

 Realizar latransformación genética de la E. coli con el gen plasmido pGLO.

 Producir células genéticamente modificadas en un cultivo celular con el fenotipo del gen pGLO, es decir, que presenten fluorescencia verde al exponerlas a la luz UV o cuando se les agrega la azúcar arabinosa.

 Determinar el grado de éxito que tuvimos al realizar la transformación genética y analizar los resultados que obtuvimos....