lactosa en leche

UNIVERSIDAD MICHOACANA DE SAN NICOLAS DE HIDALGO

FACULTAD DE
BIOLOGÍA

MANUAL DEL LABORATORIO DE

BIOQUÍMICA
ACTUALIZADO POR
QFB. Jaime Chávez Torres
Dra. Patricia Ríos Chávez
Q.F.B. Rita Sandra Mendoza Olivares
Agosto 2011

BIOQUÍMICA

PRACTICA No. 3
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL DE
CARBOHIDRATOS
INTRODUCCIÓN
La cromatografía fue inventada y nominada por el botánico ruso MijalTswett a principios del siglo pasado. La aplicación de la cromatografía se
ha incrementado en forma explosiva en los últimos cuatro decenios debido
no sólo al desarrollo de varios tipos diferentes de técnicas cromatográficas,
sino también en la necesidad creciente de los científicos de disponer de
mejores métodos para separar mezclas complejas.
La separación de compuestos que son fácilmentesolubles en líquidos
orgánicos y solo ligeramente solubles en agua se efectúa por
CROMATOGRAFIA DE ADSORCION, mientras que los compuestos
ionizables hidrosolubles se separan mejor por CROMATOGRAFÍA DE
INTERCAMBIO IONICO. La CROMATOGRAFÍA DE PARTICIÓN es
intermedia entre cromatografía de adsorción y de intercambio iónico y los
compuestos que son a la vez hidrosolubles y solubles en solventesorgánicos, se separan fácilmente por métodos de partición.
La eficiencia de la separación depende de factores como la naturaleza
química de los componentes a separar, del disolvente y del adsobente, la
geometría de la columna, la velocidad y el flujo de la disolución y del
disolvente utilizado en el desarrollo del cromatográma.
Los métodos cromatográficos pueden aplicarse no solamente a laseparación, identificación y análisis cuantitativo de aminoácidos, sino
también de péptidos, proteínas, nucleotidos, ácidos nucleicos, lípidos e
hidratos de carbono.

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BIOQUÍMICA

Cuando se agita un compuesto con dos disolventes que no se mezclan,
este se distribuye en las dos fases en equilibrio, la razón de la
concentración del compuesto en los dos solventes es constante y se
conocecomo el coeficiente de partición ( ).

 =

Concentración de X en el sol. 1.
Concentración de X en el sol. 2.



En la cromatografía de partición uno de los solventes, usualmente el agua,
permanece en la fase estacionaria que consiste en una columna ó película
de material inerte. La otra fase consiste en un líquido orgánico móvil,
saturado con agua, que fluye en relación con la faseestacionaria. Los
componentes de una mezcla se separan si los coeficientes de partición
entre los solventes son suficientemente diferentes.
Gordon, Martín y Synge han propuesto una modificación de la
cromatografía por partición que utiliza tiras de papel como adsorbente. La
celulosa en forma de hojas de papel constituye un medio de soporte muy
útil, donde el agua es adsorbida entre las fibrasde celulosa y forma la fase
hidrofílica estacionaria. La relación entre la distancia recorrida por el
solvente, se conoce como el valor Rf y es más o menos constante para
compuestos, sistemas de solventes y clase de papel determinados bajo
condiciones cuidadosamente controladas de concentración de soluto,
temperatura y pH.
La utilización del método de separación de compuestos, porcromatografía
sobre papel presenta muchas ventajas sobre los métodos tradicionales de
separación como la destilación, la cristalización, la extracción con
disolventes, precipitación química ó electrónica.

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BIOQUÍMICA

OBJETIVO
Desarrollar un procedimiento de separación de biomoléculas, e
identificarlas por un método químico.

MATERIAL
A.- POR EQUIPO
3 Capilares
* 1 Par de guantes dehule
* 1 Atomizador
* 1 Regla
* 1 Lápiz
* 1 Cinta masking

NOTA. * Material que el equipo debe aportar.

B.- POR GRUPO DE TRABAJO
Papel aluminio
1 Tijeras
4 Tanques para cromatografía
Papel para cromatografía
1 Horno

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BIOQUÍMICA

REACTIVOS
Mezcla de solventes para la cromatografía:
BUTANOL, AC. ACÉTICO, AGUA (4: 1: 2 v/v).
( 175 ml de la mezcla de solventes en cada...