Reconocimiento Y Cuantificacion De Las Proteinas

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Reconocimiento y Cuantificación de las Proteínas


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Autor: Camilo Polidori Arambarri


Introducción:

Las proteínas son macromoléculas, que componen la mayoría de las células y todo lo que posea vida, las cuales dependiendo de su lugar funcional. También se unen formando gruposprostéticos, en donde es la región que le da la funcionalidad, puede ser cofactores pero principalmente coenzimas. (1.a)
Ejemplo de aquellas tenemos los que están en las células como receptores, los anticuerpos, y las enzimas. Las proteínas son de gran tamaño, es por esta razón que les cuesta atravesar la célula. (1.b)

Posee grupos ionizables que le dan muchas características anexas propio parapoder realizar su función. Poseen cuatro estructuras que se crean a medida de cómo se conforman los aminoácidos. (2.a) Para una mayor visualización las proteínas, las cuales poseen estructuras tridimensionales, que están determinadas por su secuencia de aminoácidos, y esto va a generar la función. Uno de los mejores métodos para determinar la concentración del compuesto analito (proteína), sonlas propiedades de absorción que son: átomos, enlaces, grupo funcionales y moléculas, dado por el medio de colorimetría, este es un método experimental cuantitativo de una sustancia, esto se conoce como la capacidad de una sustancia para absorber de forma selectiva, ciertas longitudes de onda desde una fuente de luz, la cantidad de luz que se absorbe va a ser proporcional directamente al espesordel medio (agua), y a la concentración de la sustancia. (4.a)
Con esto se puede utilizar la formula de la ley de Lambert – Beer, que se expresa a través de la siguiente ecuación: DO = E C I, en donde DO es la absorbancia de la sustancia, E es el coeficiente de extinción molar, C es la concentración e I es el espesor del medio, el cual se mide en litro /M cm, si siguen esta ley, las sustanciasdeberían tener una relación lineal entre DO y la concentración, esto nos deja claro que todas las sustancias químicas tengan igual espesor y longitud de onda, a partir de esto (como una sustancia estándar), se pueden determinar otras soluciones, con parecidas propiedades a la estándar. (2.b)

El espectrofotómetro es un instrumento usado en la análisis químico que sirve para medir, en función dela longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismo.
El plasma sanguíneo posee un gran porcentaje de proteínas, por lo que es fácil aplicarle técnicas paracuantificar y reconocerlas. (3.a) Posee una porción de albúmina, y un resto de anticuerpos, proteínas globulares y fibrilares. Esto todo puede variar dependiendo de donde sea obtenido, si el individuo poseía un buen estado nutricional.

Objetivos:
- Visualizar y reconocer proteínas.
- Aprender a utilizar un electrofotómetro.
- Comprender la técnica de colorimetría
- Diferenciar dos técnicas paradiversas longitudes de onda.
Materiales y Métodos:

El práctico se realizó preparando todos los materiales que se utilizaran. En una gravilla, se dispusieron los tubos de ensayo, los cuales se prepararon tres muestras distintas con 0,3 ml de cada sustancia en cada tubo. LA primera denominada sustancia blanco, el que conteniente Cloruro de Sodio (NaCl al 0,9%), después la muestra estándar queera SAB (suero albúmina bovino), el cual posee aminoácidos, que forman una proteína purificada del suero de una que va con concentración de 1,7 mg/ ml. En último lugar el analito que es el plasma diluido al 0,9% de NaCl.
Los cuales fueron expuestos a una longitud de onda de 280nm proveniente de una fuente de luz ultravioleta. Cada una de estas muestras por separado se derraman en una cubeta de...