Biologo

Reporte de Práctica: Extracción de RNA a partir de tejido gonadal de ostra juvenil

Extracción de RNA
Es uno de los pasos críticos para diversos ensayos en biología molecular, del manejo ycriterios utilizados durante la purificación, depende la calidad y el aislamiento exitoso, del cual depende el desempeño y resultados en las pruebas a realizar con el RNA.
Método
Dependiendo del tipo ycalidad de tejido, será la rapidez y dificultad para la obtención, por lo que es importante conocer el tejido del cual se va a obtener la muestra, para evitar una degradación de RNA. Con esta informacióny la correcta manipulación se aumenta la productividad y calidad de RNA.
Para el aislamiento exitoso de RNA intacto se comentaron varios puntos importantes:
Limpieza
Evitando la degradación porribonucleasas exógenas, haciendo hincapié en la limpieza del área destinada a este fin, de principio a fin, el uso de guantes durante todo el procedimiento, el uso de insumos, equipo, pipetas yreactivos destinados para este fin específicamente.
El uso de soluciones inhibidoras de RNAsas, el uso de agua de-ionizada con Di-etil-pirocarbonato (DEPC, es un agente alcalino altamente reactivo quedestruye la actividad enzimática de las RNAsas y otras proteínas)
Disección, preservación y homogenización
El RNA es susceptible a degradación, se usan métodos con desnaturalizantes, para inhibir laactividad de las RNAsas endógenas (enzimas muy activas q en cantidades traza pueden degradar el RNA).
La fragilidad de la molécula y su baja estabilidad termodinámica, produce rupturas a lo largo de lamolécula, por lo que es importante el uso de buffers para evitar que después de ser aislado sufra degradación.
Para la obtención de muestra, que el proceso de disección sea correcto, y la importanciade métodos seguros de preservación del tejido problema también fueron comentados, tomando ejemplos como el Nitrógeno liquido y el RNAlater.

El rompimiento del tejido y la homogenización maximizan...