Clonacion

CARACTERIZACION Y USO DE FRAGMENTOS CLONADOS DE ADN.
La electroforesis permite la separación del DNA del vector de los fragmentos clonados.
Para manipular o secuenciar un fragmento de DNA, debeseparase del DNA vector. EL DNA clonado y el DNA vector son sometidos luego a electroforesis en gel un método poderoso para separa moléculas de DNA de diferentes tamaños, las moléculas de DNA puedenestar compuestas por hasta 2000 nucleótidos.
Un método común para visualizar bandas de DNA separadas en un gel es incubarlo en un solución que contenga el colorante fluorescente que sería bromuro deetidio, ya cuando el fragmento de ADN se halla separado del vector de ADN se trata con diversas enzimas de restricción para producir fragmentos más pequeños, todos o algunos de estos fragmentos maspequeños pueden ser ligados individualmente a un vector plasmidico, este proceso, conocido como subclonacion.
Los pasos para fragmentación de restricción de DNA son 3 :
1. Se coloca la muestra en elcarril de un gel de agarosa o poliacrilamida. Se aplica un campo eléctrico.
2. Las moléculas migran a través de los poros en un gel a una velocidad inversamente proporcional a la longitud de lascadenas.
3. Se somete a autorradiografia o se incuba con marcador fluorescente.

Las moléculas de ADN clonado son secuenciados con rapidez mediante el método de terminación de cadena o métododidesoxi .
La idea básica de este método es sintetizar, a partir de los fragmentos de ADN por ser secuenciados, un grupo de hebras hijas que son marcadas en un extremo y que difieren en longitud por unnucleótido.

Los ADN clonados pueden ser secuenciados por el método de sanger, utilizando desoxirribonucleosidos trifosfatos marcados con fluorescencia.
(a) Una hebra simple de ADN por sersecuenciada se hibrida a un sebador sintetico desoxirribonucleosidos . El cebador es elongado en un mezcla de reacción que contienen los cuatro desoxirribonucleosidos trifosfatos normales más una...