Conteo en placa

CONTEO DE PLACA

“Consiste en contar colonias que se desarrollan después de cierto tiempo en el medio de elección presupone que cada colonia proviene de un microorganismo en la muestra. Vertido y Superficie”
De todos los tipos de contaminación ambiental, puede destacarse la
Contaminación del agua. Muchas veces el agua puede ser completamente transparente, incolora e inodora, pero estar auncontaminada, por lo que, es importante determinar su calidad sanitaria.
La potabilidad del agua sólo se puede determinar mediante análisis químicos y bacteriológicos.
Los procedimientos bacteriológicos de rutina son: recuento de bacterias mesófilas, aerobias, coliformes totales, coliformes fecales, estreptococos, fecales y clostridios sulfitos reductores.
Los recuentos de mesófilos Aeróbicos enplaca son útiles para determinar la potabilidad de un agua, así como también la eficiencia de las operaciones para eliminar microorganismos, como la sedimentación, filtración y cloración.
Las cuentas se deben hacer antes y después del tratamiento específico.
Los resultados indicarán la medida en que ha sido reducida la población microbiana. Lo usual es que el agua de buena calidad, para consumohumano, tenga cuentas bajas: < 100 UFC por mililitro.
La determinación del conteo de bacterias mesófilas aerobias en una muestra de agua se realiza, normalmente, por siembra en una placa, de un volumen determinado de agua, por incubación a una temperatura concreta y en un tiempo determinado, y por recuento posterior de las colonias desarrolladas y con la aceptación implícita de que cadacolonia es originada por una bacteria de la muestra inicial, por lo tanto, el número de colonias equivaldrá al número de bacterias en el volumen sembrado.

Reglas para conteo en placa
1. Seleccionar aquellas placas donde aparezcan de 30 a 300 colonias, pues hay menor error en el conteo.
2. Contar todas las colonias de la placa. Si el número se estima mayor de 300 y no hay dilucionessubsecuentes:
3. 301-500 colonias se divide en dos partes y el número de colonias contadas se multiplica por 2.
4. 501-800 colonias se divide en cuatro partes y el número de colonias contadas se multiplica por 4.
5. >800 colonias se cuentan de 10 a 20 cuadros se promedia y se multiplica por el número de cuadros que ocupa la caja.
6. El número de colonias contadas deberá sermultiplicada por el inverso de la dilución y considerar si la técnica fue por vertido o por superficie (debido al volumen de la muestra).
7. Redondear la cifra obtenida en el recuento de tal forma que haya dos dígitos al inicio de la cifra por ejemplo:
* 129 se reporta 130
* 2,417 se reporta 2400
* 49 se reporta 49

OBJETIVO
Determinar la presencia de bacteriasMesófitas Aerobias en una muestra de agua potable por la técnica de placa vertida.

Practica
MATERIALES, SUBSTANCIAS Y EQUIPOS:

Muestras de agua potable de diferente origen (Grifo, purificada y embotellada u otro), de un volumen mínimo de 100 ml obtenida en recipiente estéril y con tiosulfato de Sodio al 10%.

* 3 tubos de ensayo conteniendo c/u 9 ml de agua de dilución estéril. (Apéndice C)* 9 tubos de 20 x 160 mm, con tapón conteniendo c/u de 15-20 ml de agar cuenta estándar estéril, manteniéndolo a 45-47 °C en baño de temperatura constante.
* Gradilla
* Pipetas estériles de 1 ml graduadas en décimas.
* 9 cajas Petri estériles.
* Mechero Bunsen.
* Cerillos ó encendedor.
* Incubadora.
* Contador de Colonias Quebec.

Metodología
En condicionesasépticas:
1. Agitar vigorosamente la muestra de agua, para homogeneizar.
2. Pipetear 1 ml de muestra y verterlo en el primer tubo con 9 ml de agua de dilución estéril, quedando entonces una dilución de 10-1. (Fig. 16.1)
3. Agitar para homogeneizar y tomar 1 ml de esta dilución (10-1) y verterlo en el segundo tubo, quedando una dilución de 10-2.
4. Agitar para homogeneizar y tomar 1...