Determinación de proteínas
Páginas: 5 (1161 palabras)
Publicado: 12 de octubre de 2010
TRONCO COMUN DIVISIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y DE LA SALUD. MODULO: ENERGIA Y CONSUMO DE SUSTANCIAS FUNDAMENTALES. PRACTICA No. 2 DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS. METODO DE BIURET
OBJETIVO: • • Manejar en el laboratorio el método de Biuret para determinar proteínas. Observar y determinar experimentalmente el efecto del pH sobre las proteínas de la leche.
GENERALIDADES: • Investigaciónbibliográfica de los estudiantes sobre colorimetría y punto isoeléctrico de proteínas.
MATERIAL POR EQUIPO: 1 probeta de 50 ml 2 gradillas 2 pipetas de 10 ml 3 pipetas de 5 ml 1 pipeta de 1 ml Tubos de 15 x 100 – 12 piezas 1 vaso de precipitados de 100 ml 12 tubos de 16 x 150 1 balanza granataria Papel parafilm para 10 tubos Si es necesario, 1 embudo y papel filtro.
1
REACTIVOS POR EQUIPO: Aguadestilada. Solución de ácido acético 0.1 N Solución de acetato de sodio 0.1 N Solución de caseína (concentración 4 mg/ml) Reactivo de Biuret 50 ml. NOTA: El éxito de esta práctica depende en gran parte de la limpieza del material. Asegúrese que todo este perfectamente limpio.
APARATOS POR EQUIPO: 1 centrífuga clínica 1 balanza granataria 2 espectrofotómetros 4 celdas
LOS ALUMNOS DEBERAN TRAERPOR EQUIPO: 6 gr. Aproximadamente de leche en polvo descremada 1 plumón indeleble Masking tape. Jabón y franela para limpiar.
1. DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO. 1.1. Preparación de una serie de tubos con solución amortiguadora de acetatos. Coloca en una gradilla 6 tubos de 15 x 100 rotulados con números consecutivos. Adiciona a cada tubo las soluciones ácido acético y acetato de sodioque indica la siguiente tabla: TUBO 1 2 3 4 5 6 Solución ácido acético 0.1 N 5 ml 4 ml 3 ml 2 ml 1 ml Solución acetato de sodio 0.1 N 1 ml 2 ml 3 ml 4 ml 5 ml
El volumen final de cada tubo deberá ser de 5 ml. 2
2. PREPARACIÓN DE LA LECHE
2.1. En un vaso de precipitados de 100 ml disuelve 6 gr. De leche en polvo descremada, con 50 ml de agua destilada. NOTA: añade el agua poco a poco paraevitar que se formen grumos que podrían dificultar la obtención de una solución homogénea. No debes calentar la leche para disolverla. 2.2. En un tubo de ensaye de 16 x 150 mm mide 2 ml de la leche rehidratada preparada como se indicó anteriormente y añade 8 ml de agua destilada, agita cuidadosamente por inversión. Esta muestra de leche diluida (1:5) se ocupará para llevar a cabo la determinacióndel punto isoeléctrico de las proteínas descrito en el siguiente párrafo:
3. PUNTO ISOELÉCTRICO.
3.1. Añade 1 ml de la leche diluida (1:5) a cada tubo de solución amortiguadora que preparaste en el punto 1. 3.2. Mezcla cuidadosamente por inversión todos los tubos y deja reposar por espacio de 10 minutos. Observa el aspecto de las mezclas preparadas. En el tubo donde observes grumos de lechesuspendidos en la solución te indicará que las proteínas de la leche se han insolubilizado debido al pH de la solución este pH es denominado PUNTO ISOELÉCTRICO. 3.3. Centrifuga los tubos a 2500 r.p.m. durante 10 minutos NO SIN ANTES BALANCEARLOS. Deberá pesar lo mismo que aquel tubo que ocupará el lugar opuesto dentro de la centrifuga. 3.4. Separa el sobrenadante (cuidando de no resuspender elprecipitado acumulado en el fondo del tubo) y transfiere a tubos limpios de 15 x 100 rotulalos con el número de tubo que les corresponde.
4. DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS CON EL METODO DE BIURET. 4.1. Coloca en una gradilla 11 tubos de 16 x 150 mm, rotula uno de ellos como número cero, el cual llevará los reactivos para calibrar el espectofotómetro (blanco de reactivos o testigo) los siguientes 4tubos llevarán números consecutivos del 1 al
3
IV y los restantes (del 1 al 6) los rotularás con el número que corresponda a los sobrenadantes obtenidos por centrifugación según se indicó en el punto 3.4. 4.2. Añade a cada tubo los reactivos para determinar proteínas en la curva de calibración (tubos I a IV) y en los sobrenadantes (tubos 1 a 6) de acuerdo a lo indicado en la siguiente tabla:...
OBJETIVO: • • Manejar en el laboratorio el método de Biuret para determinar proteínas. Observar y determinar experimentalmente el efecto del pH sobre las proteínas de la leche.
GENERALIDADES: • Investigaciónbibliográfica de los estudiantes sobre colorimetría y punto isoeléctrico de proteínas.
MATERIAL POR EQUIPO: 1 probeta de 50 ml 2 gradillas 2 pipetas de 10 ml 3 pipetas de 5 ml 1 pipeta de 1 ml Tubos de 15 x 100 – 12 piezas 1 vaso de precipitados de 100 ml 12 tubos de 16 x 150 1 balanza granataria Papel parafilm para 10 tubos Si es necesario, 1 embudo y papel filtro.
1
REACTIVOS POR EQUIPO: Aguadestilada. Solución de ácido acético 0.1 N Solución de acetato de sodio 0.1 N Solución de caseína (concentración 4 mg/ml) Reactivo de Biuret 50 ml. NOTA: El éxito de esta práctica depende en gran parte de la limpieza del material. Asegúrese que todo este perfectamente limpio.
APARATOS POR EQUIPO: 1 centrífuga clínica 1 balanza granataria 2 espectrofotómetros 4 celdas
LOS ALUMNOS DEBERAN TRAERPOR EQUIPO: 6 gr. Aproximadamente de leche en polvo descremada 1 plumón indeleble Masking tape. Jabón y franela para limpiar.
1. DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO. 1.1. Preparación de una serie de tubos con solución amortiguadora de acetatos. Coloca en una gradilla 6 tubos de 15 x 100 rotulados con números consecutivos. Adiciona a cada tubo las soluciones ácido acético y acetato de sodioque indica la siguiente tabla: TUBO 1 2 3 4 5 6 Solución ácido acético 0.1 N 5 ml 4 ml 3 ml 2 ml 1 ml Solución acetato de sodio 0.1 N 1 ml 2 ml 3 ml 4 ml 5 ml
El volumen final de cada tubo deberá ser de 5 ml. 2
2. PREPARACIÓN DE LA LECHE
2.1. En un vaso de precipitados de 100 ml disuelve 6 gr. De leche en polvo descremada, con 50 ml de agua destilada. NOTA: añade el agua poco a poco paraevitar que se formen grumos que podrían dificultar la obtención de una solución homogénea. No debes calentar la leche para disolverla. 2.2. En un tubo de ensaye de 16 x 150 mm mide 2 ml de la leche rehidratada preparada como se indicó anteriormente y añade 8 ml de agua destilada, agita cuidadosamente por inversión. Esta muestra de leche diluida (1:5) se ocupará para llevar a cabo la determinacióndel punto isoeléctrico de las proteínas descrito en el siguiente párrafo:
3. PUNTO ISOELÉCTRICO.
3.1. Añade 1 ml de la leche diluida (1:5) a cada tubo de solución amortiguadora que preparaste en el punto 1. 3.2. Mezcla cuidadosamente por inversión todos los tubos y deja reposar por espacio de 10 minutos. Observa el aspecto de las mezclas preparadas. En el tubo donde observes grumos de lechesuspendidos en la solución te indicará que las proteínas de la leche se han insolubilizado debido al pH de la solución este pH es denominado PUNTO ISOELÉCTRICO. 3.3. Centrifuga los tubos a 2500 r.p.m. durante 10 minutos NO SIN ANTES BALANCEARLOS. Deberá pesar lo mismo que aquel tubo que ocupará el lugar opuesto dentro de la centrifuga. 3.4. Separa el sobrenadante (cuidando de no resuspender elprecipitado acumulado en el fondo del tubo) y transfiere a tubos limpios de 15 x 100 rotulalos con el número de tubo que les corresponde.
4. DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS CON EL METODO DE BIURET. 4.1. Coloca en una gradilla 11 tubos de 16 x 150 mm, rotula uno de ellos como número cero, el cual llevará los reactivos para calibrar el espectofotómetro (blanco de reactivos o testigo) los siguientes 4tubos llevarán números consecutivos del 1 al
3
IV y los restantes (del 1 al 6) los rotularás con el número que corresponda a los sobrenadantes obtenidos por centrifugación según se indicó en el punto 3.4. 4.2. Añade a cada tubo los reactivos para determinar proteínas en la curva de calibración (tubos I a IV) y en los sobrenadantes (tubos 1 a 6) de acuerdo a lo indicado en la siguiente tabla:...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.