DETERMINAZION ENZIMATICA

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
septiembre 9
2013

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
BIOQUIMICA EXPERIMENTAL


 
Contenido
DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA 2
I. INTRODUCCION. 2
II. OBJETIVOS. 3
III. MATERIALES Y REACTIVOS. 3
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL. 4
4.1. CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA POR EL SUSTRATO RESIDUAL. 5
4.2. CONTROL DE ACTIVIDAD ENZIMATICAPOR LOS PRODUCTOS FORMADOS 5
V. CONCLUSION 6
VI. CUESTIONARIO 7
6.1. ¿Cómo puede medirse la actividad de una enzima? 7
6.2. ¿Qué es una enzima? 7
6.3. ¿Qué entiendes por sitio activo de una enzima? 7
6.4. ¿Qué entiendes por especificidad enzimatica? 7
6.5. ¿Qué entiendes por sustrato? 7
6.6. ¿Cuáles son los componentes estructurales del almidon? 7
6.7. ¿de que manera el ion cloruro y activaa la amilasa? 7
6.8. ¿Qué diferencia se puede establecer entre enzima dializada y enzima no dializada en función de la actividad enzimatica? 7
6.9.¿Que finalidad tiene la utilización de la solución yodada en el sistema? 8
VII. BIBLIOGRAFIA. 8






DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
I. INTRODUCCION.

En Bioquímica, se llaman enzimas las sustancias de naturaleza proteica quecatalizan reacciones químicas, siempre que sea termodinámicamente posible (si bien no pueden hacer que el proceso sea más termodinámicamente favorable). En estas reacciones, las moléculas sobre las que actúa la enzima en el comienzo del proceso son llamadas sustratos, y estas los convierten en diferentes moléculas, los productos.

Existen diversos métodos para medir la velocidad de una reacciónenzimática. La espectrofotometría permite detectar cambios en la absorbancia de luz por parte del sustrato o del producto (según la concentración de estos) y la radiometría implica incorporación o liberación de radiactividad para medir la cantidad de producto obtenido por tiempo. Los ensayos espectrofotométricos son los más utilizados, ya que permiten medir la velocidad de la reacción de formacontinua. Por el contrario, los ensayos radiométricos requieren retirar las muestras para medirlas, por lo que son ensayos discontinuos. Sin embargo, estos ensayos son extremadamente sensibles y permiten detectar niveles muy bajos de actividad enzimática.

Algunos factores que pueden modificar la actividad enzimática son el pH, la temperatura y la concentración salina. Estos factores favorecen ladesnaturalización, proceso en el cual se da un cambio estructural de las proteínas o ácidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su óptimo funcionamiento y a veces también cambian sus propiedades físico-químicas.

Así una proteína desnaturalizada pierde su estructura tridimensional y por tanto su función biológica.






II. OBJETIVOS.

Demostrar la capacidadcatalítica de la amilasa salival determinando:
 La Presencia de almidón no transformado (sustrato residual).
 La presencia de azucares reductores (Producción de reacción).
III. MATERIALES Y REACTIVOS.

 6 tubos de ensayo.
 Pipetas.
 Mecanismo o equipo de Baño de tubo maria.
 Solución de almidón pH 6.0 al 1%.
 Cloruro de sodio 0.1M.
 Enzima al 1%.
 Ácido clorhídrico 0.05 N.
Solución Yodada.
 Reactivo de Benedict cualitativo.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.

Se investigara la actividad de la amilasa salival: Enzima que como la pancreática, tiene la capacidad especifica de producir la degradación del almidón a maltosa (disacárido reductor) y algo de glucosa como ejemplo de un sistema enzimático.
Armar el siguiente sistema:
COMPOONENTES TUBO I TUBO II
_ Solución dealmidón 1% pH6.9 5 ml 5ml
_Solución de cloruro de sodio 0.1 M 1 ml 1ml
_ Agua destilada 4 ml 3ml

a. Colocar los tubos al baño de agua a 37°C por 5 minutos.
b. Agregar 1 ml de enzima al tubo II.
c. Volverlos a colocar al baño de agua a 37°C durante 10 minutos.






4.1. CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA POR EL SUSTRATO RESIDUAL.

De cada uno de los tubos de incubación,...