Fotocolorimetria

FOTOCOLORIMETRIA Y CURVA DE CALIBRACION
OBJETIVOS Analizar los principios básicos de la fotocolorimetría.
Determinar el espectro de absorción de un compuesto coloreado.Seleccionar la longitud de onda óptima o de máxima absorción.
Realizar la curva de calibración para una solución de albúmina.
Calcular concentraciones desconocidas de muestras deproteínas.
METODOLOGIA
2.1. Determinación del Espectro de Absorción
a. Colocamos la longitud de onda en el instrumento a 420 nm.
b.Preparamos dos celdas o tubos con suficientesolución (aproximadamente hasta los ¾), utilizando en una, agua destilada y en la otra una solución de albúmina coloreada con el reactivo de Biuret.
c.Observamos que los tubos con las soluciones no tenganburbujas, y los limpiamos externamente con un papel o tela adecuada.
d. Calibramos el instrumento.
e.Colocamos el tubo con la solución problema y luego anotamos la absorbancia o transmitanciaindicada en el instrumento.
f. Repetimos los pasos anteriores pero aumentando la longitud de onda de 20 en 20 nm hasta alcanzar los 620nm. Luego tabulamos los datos obtenidos.
g. Dibujamos unagrafica de Absorbacia vs Longitud de Onda
2.2. Curva de Calibración para Soluciones de Albumina.
c. Colocamos en el fotocolorímetro la longitud de onda de máxima absorbancia obtenida en laexperiencia sobre el espectro de absorción (numeral 2.1), medimos la absorbancia para cada uno de los tubos y tabulamos.
e. Graficamos los resultados absorbancia y concentración tabulados en d, la línearesultante corresponde a la curva de calibración.
RESULTADOS Y ANALISIS En el análisis espectrofotométrico, fue necesario conocer el espectro de absorción de la muestra problema, midiendo laabsorbancia a distintas longitudes de onda para establecer la frecuencia de máxima absorción de la especie a determinar, con el propósito de obtener una mejor sensibilidad en su cuantificación. El...