Gfp como etiqueta fluorescente para detección de tráfico celular de proteínas.

GFP COMO ETIQUETA FLUORESCENTE PARA
DETECCIÓN DE TRÁFICO CELULAR DE PROTEÍNAS.

Natalia Evtikhova Evtikhov 3º de grado de BTG 2011-12

GFP como etiqueta fluorescente para detección de tráfico celular de proteínas. Natalia Evtikhova Evtikhov 3º de grado de BTG 2011-12

Introducción
Las proteínas, son quizás las biomoléculas más importantes de la célula, que desempeñan multitud funciones,como parte de estructura de la célula en su membrana, dando le forma a través del citoesqueleto, transportando sustancia adentro y fuera de la célula, transportando moléculas por el interior celular, y catalizando reacciones bioquímicas. Evidentemente, el estudio molecular de la célula es, en gran parte, el estudio de sus proteínas. Pero ¿Cómo podemos conocer en que función está implicada unaproteína concreta? ¿Dónde se localiza? ¿Cuál es su regulación? Para poder responder estas preguntas, tenemos la ayuda de las llamadas “Etiquetas”. Existen varios tipos de etiquetas. El método más usado son las proteínas de fluorescencia intrínseca (FP s), que están basadas en la secuencia y estructura de la Proteína verde fluorescente, GFP, la primera descubierta. Esta familia de proteínas ofreceuna amplia paleta de colores fluorescentes, con buenas características de luminosidad y estabilidad de la fluorescencia. Otro importante grupo de etiquetas “Etiquetas Halo”, no ofrece la fluorescencia propia, sin embargo son capaces de unir covalentemente una serie de moléculas fluorescentes, y si las fusionamos en fase a nuestras proteínas y añadimos un ligando fluorescente a la reacción, nuestraproteína también quedará marcada. También podemos usar enzimas, que son capaces catalizar reacciones, tras las cuales nuestra proteína de interés quede asimismo unida al ligando fluorescente. El presente trabajo se centra en las FPs, en concreto en la GFP, que es la primera descubierta , y las demás son sus variaciones. [1]

La GFP, sus estructura y propiedades.

GFP como etiquetafluorescente para detección de tráfico celular de proteínas. Natalia Evtikhova Evtikhov 3º de grado de BTG 2011-12 La GFP fue descubierta en el año 1961 por los científicos Osama Shimomura y Frank Johnson en la universidad de Washington, quienes la aislaron desde la medusa gelatina cristal (Aequorea victoria), famosa por emitir fluorescencia verde. Más tarde se comprobó que La GFP emite la fluorescenciacuando la medusa libera iones de calcio que activan la emisión de luz azul por parte de la proteína aequorina. Esta luz azul es la que activa la fluorescencia verde de la GFP. Los primeros experimentos exitosos de marcaje con GFP fueron realizados en el 1987 por Douglas Prasher. En el año 1992 se obtuvieron primeros clones de la GFP. Y en el 2008 Osama Shimomura ( entre otros científicos) esgalardonado con el Premio Nobel de Química "por el descubrimiento y desarrollo de la proteína fluorescente verde " , quedando definitivamente demostrada la importancia de la GFP en el estudio de la célula. [2] Se trata de unas proteínas más bien pequeñas, compactas e inertes, y todas comparten la misma estructura que consiste en un barril formado por once estructuras secundarias tipo láminas beta, querodea una alfa hélice distorsionada, como aparece en el dibujo:

GFP como etiqueta fluorescente para detección de tráfico celular de proteínas. Natalia Evtikhova Evtikhov 3º de grado de BTG 2011-12
Imagen 1 : El dominio de alfa hélice es el que confiere la fluorescencia, dado que su destorción permite cque tres aminoácidos, treonina, glicina, y tirosina, reaccionen entre ellos dando unfluoroforo. A su vez, el dominio “Barril” facilita un medio adecuado para la estabilidad del fluoroforo. Esta conformación proteíca tan curiosa, es la que brinda a la GFP las propiedades fluorescentes que tiene: gran intensidad, estabilidad, excitabilidad muy espécifica (sólo un estrecho rango de luz ultravioleta funciona con ella), lo que hace que los experimentos realizados con la GFP sean de gran...