Informe Laboratorio 2 Bioquimica 1
Páginas: 6 (1371 palabras)
Publicado: 12 de mayo de 2015
Angélica Garzón Fandiño, Andrea Duarte M.
11 de Mayo, 2015
INFORME 7. EXTRACCIÓN Y VERIFICACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS: SUCCÍNICO DESHIDROGENASA Y CITOCROMO OXIDASA Y ESTUDIO DEL EFECTO DE ALGUNOS INHIBIDORES
1. Seguimiento de la reacción catalizada por la citocromo oxidasa.
REACCIÓN CATALIZADA POR LA CITOCROMO OXIDASA
MUESTRA
PRUEBA
OBSERVACION
RESULTADOS
Blanco
La reaccióncatalizada por la citocromo oxidasa
La muestra no toma ninguna coloracion puesto que no tiene inhibidor que haga actuar a la enzima (Negativo) primer tubo
Tubo 1
La reacción catalizada por la citocromo oxidasa
La muestra toma un color oscuro debido a que la p-fenililendiamina ayuda a la oxidacion. (POSITIVO) “segundo tubo”
Tubo 2
La reacción catalizada por la citocromo oxidasa
La muestra no seoscurece mucho debido a que el cianuro de potasio actua como inhibidorpara de la enzima (POSITIVO)
“tercer tubo”
Tubo 3
La reacción catalizada por la citocromo oxidasa
La muestra toma una coloración oscura totalmente puesto que la enzima se oxida gracias al malonato de sodio y la p-fenililendiamina (POSITIVO)
“cuarto tubo”
Tubo 4
La reacción catalizada por la citocromo oxidasa
La muestrano se oscuresio mucho debido a que la azida de sodio actua como inhibidor (POSITIVO) “quinto tubo”
La enzima citocromo c oxidasa o complejo IV, (EC 1.9.3.1) es un gran complejo de proteínas transmembrana que se encuentra en bacterias y la mitocondria. Es la última enzima de la cadena de transporte de electrones respiratoria de las mitocondrias situado en la membrana mitocondrial. (L, Mateo, 2008)Citocromo oxidasa
Este complejo tiene una región hidrofílica que sobresale al espacio intermembrana que posee el sitio de unión del citocromo c y las subunidades I y II de este complejo contienen cuatro centros redox activos: dos hemos tipo a (a y a3) y dos átomos de Cuay Cub que alternan entre los estados de oxidación +1 y +2. A diferencia de los otros citocromos de la cadena respiratoria, lasexta posición de coordinación del átomo de fierro en el citocromo a3 está desocupada. (B,Natalia, 2005)
Por lo cual reacciona asi:
Este comlejo cataliza la formacion de agua a partir de los 2 e-, ½ O y 2H+ este contribuye con la generacion de un gradiente de protones suficientemente para generear un ATP. El oxigeno se reduce a agua, mientras la energia libera por los electrons permiten lafosforilacion del ADP a ATP: este proceso se denomina fosforilacion oxidativa. (J. Monza, 2011)
Es importante destacar que la citocromo oxidasa completa la reducción del oxígeno a agua sin que se liberen intermediarios tóxicos como el anión superóxido y el agua oxigenada. El mitocondria posee la enzima superóxido dismutasa dependiente del manganeso que protege del efecto tóxico del posible superóxidogenerado. (B,Natalia, 2005)
Para este expeimento se utilizo extracto enzimatico de cerebro por lo cual se demoro 30 minutos para evidenciar la fosforilacion oxidativa puesto que el este no contiene mucho hierro y esto hace que tarde mas en hacer el proceso. Pero lo podemos evidenciar en los tubos de ensayo 1 y 3, al agregar la p-fenililendiamina notamos que toma un color mas oscuro que las demasmuestras y esto se debe a que son aminas aromáticas primarias derivados, diamino del benceno, el citocromo oxidasa no reacciona directamente con el reactivo fenilendiamina pero oxida al citocromo C que a su vez oxida al reactivo, la fenilendiamina es metilada y cuantos mas grupos metilados se introducen en el radical amino el color es mas azul. Si se introducen tres grupos fenilos en lugar del metiloel color es aun más oscuro (L, Camilo, 2010). Además al tubo 3 tambien se le agrego malonato de sodio que es una sal orgánica utilizada por las bacterias como única fuente de carbono con formaron de productos alcalinos que se evidencia por un viraje de verde a azul del indicador del medio (M, laura, 2012), razon por la cual en este tubo se evidencia un color mas oscuro.
En los tubos 2 y 4 no...
Angélica Garzón Fandiño, Andrea Duarte M.
11 de Mayo, 2015
INFORME 7. EXTRACCIÓN Y VERIFICACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS: SUCCÍNICO DESHIDROGENASA Y CITOCROMO OXIDASA Y ESTUDIO DEL EFECTO DE ALGUNOS INHIBIDORES
1. Seguimiento de la reacción catalizada por la citocromo oxidasa.
REACCIÓN CATALIZADA POR LA CITOCROMO OXIDASA
MUESTRA
PRUEBA
OBSERVACION
RESULTADOS
Blanco
La reaccióncatalizada por la citocromo oxidasa
La muestra no toma ninguna coloracion puesto que no tiene inhibidor que haga actuar a la enzima (Negativo) primer tubo
Tubo 1
La reacción catalizada por la citocromo oxidasa
La muestra toma un color oscuro debido a que la p-fenililendiamina ayuda a la oxidacion. (POSITIVO) “segundo tubo”
Tubo 2
La reacción catalizada por la citocromo oxidasa
La muestra no seoscurece mucho debido a que el cianuro de potasio actua como inhibidorpara de la enzima (POSITIVO)
“tercer tubo”
Tubo 3
La reacción catalizada por la citocromo oxidasa
La muestra toma una coloración oscura totalmente puesto que la enzima se oxida gracias al malonato de sodio y la p-fenililendiamina (POSITIVO)
“cuarto tubo”
Tubo 4
La reacción catalizada por la citocromo oxidasa
La muestrano se oscuresio mucho debido a que la azida de sodio actua como inhibidor (POSITIVO) “quinto tubo”
La enzima citocromo c oxidasa o complejo IV, (EC 1.9.3.1) es un gran complejo de proteínas transmembrana que se encuentra en bacterias y la mitocondria. Es la última enzima de la cadena de transporte de electrones respiratoria de las mitocondrias situado en la membrana mitocondrial. (L, Mateo, 2008)Citocromo oxidasa
Este complejo tiene una región hidrofílica que sobresale al espacio intermembrana que posee el sitio de unión del citocromo c y las subunidades I y II de este complejo contienen cuatro centros redox activos: dos hemos tipo a (a y a3) y dos átomos de Cuay Cub que alternan entre los estados de oxidación +1 y +2. A diferencia de los otros citocromos de la cadena respiratoria, lasexta posición de coordinación del átomo de fierro en el citocromo a3 está desocupada. (B,Natalia, 2005)
Por lo cual reacciona asi:
Este comlejo cataliza la formacion de agua a partir de los 2 e-, ½ O y 2H+ este contribuye con la generacion de un gradiente de protones suficientemente para generear un ATP. El oxigeno se reduce a agua, mientras la energia libera por los electrons permiten lafosforilacion del ADP a ATP: este proceso se denomina fosforilacion oxidativa. (J. Monza, 2011)
Es importante destacar que la citocromo oxidasa completa la reducción del oxígeno a agua sin que se liberen intermediarios tóxicos como el anión superóxido y el agua oxigenada. El mitocondria posee la enzima superóxido dismutasa dependiente del manganeso que protege del efecto tóxico del posible superóxidogenerado. (B,Natalia, 2005)
Para este expeimento se utilizo extracto enzimatico de cerebro por lo cual se demoro 30 minutos para evidenciar la fosforilacion oxidativa puesto que el este no contiene mucho hierro y esto hace que tarde mas en hacer el proceso. Pero lo podemos evidenciar en los tubos de ensayo 1 y 3, al agregar la p-fenililendiamina notamos que toma un color mas oscuro que las demasmuestras y esto se debe a que son aminas aromáticas primarias derivados, diamino del benceno, el citocromo oxidasa no reacciona directamente con el reactivo fenilendiamina pero oxida al citocromo C que a su vez oxida al reactivo, la fenilendiamina es metilada y cuantos mas grupos metilados se introducen en el radical amino el color es mas azul. Si se introducen tres grupos fenilos en lugar del metiloel color es aun más oscuro (L, Camilo, 2010). Además al tubo 3 tambien se le agrego malonato de sodio que es una sal orgánica utilizada por las bacterias como única fuente de carbono con formaron de productos alcalinos que se evidencia por un viraje de verde a azul del indicador del medio (M, laura, 2012), razon por la cual en este tubo se evidencia un color mas oscuro.
En los tubos 2 y 4 no...
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