Listeria

DETERMINACIÓN Listeria monocytogenes EN ALIMENTOS

RESUMEN

Determinación de Listeria monocytogenes por métodos convencionales para la detección e identificación en muestras de alimentos, requiriendo el uso de agentes selectivos y procedimientos de enriquecimiento que mantengan los niveles de microorganismos contaminantes en valores razonables y permitan la multiplicación de L.monocytogenes hasta niveles que sean suficientes para poder detectar este microorganismo.

ABSTRACT
Listeria's determination monocytogenes for conventional methods for the detection and identification in signs of foodstuff , requiring selective agents' use and procedures of enrichment that they maintain contaminating microorganisms' levels in reasonable values and allow to the multiplication of L.monocytogenes to levels that they be enough for could have detected this microorganism.

OBJETIVOS

• Capacitar a los estudiantes con la técnica de laboratorio para determinar Listeria monocytogenes en alimentos.

• Identificar de manera macroscópica Listeria monocytogenes.

• Concientizar al estudiante de importancia para la salud, la presencia de microorganismos no deseados(patógenos).

INTRODUCCIÓN

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

Materiales

Muestra 25 gr. Queso

Tenedor y cuchillo estéril

Balanza

Frasco capacidad 225 ml. Esterilizado

Cajas Petri

Reactivos

Caldo de enriquecimiento selectivo para Literia sp.

Medio de cultivo PALCAM

CRYSTAL KIT

Equipos

Incubadora a 30°c

Mechero de bunsen

Papel Aluminio

Asa redonda.

MÉTODOEnriquecimiento selectivo

• Con ayuda de tenedor y cuchillo desmenuzar la muestra y pesarla.

• Pesar en el papel aluminio 25 gr de la muestra.

• Pasar los 25 gr de la muestra a 225 ml de el caldo selectivo para Listeria sp.

• Incubar a 30 °C por 5 días.

Siembra en placa con medio selectivo

• A partir de los cultivos obtenidos del enriquecimiento selectivo,sembrar en superficie con asa por agotamiento en placas con el medio cultivo selectivo Agar PALCAM.

• Incubar las cajas de Petri a 37°C por 24 horas.

Identificación de Colonias Presuntivas

• Contar las colonias con las siguientes características: negras con halo café verdoso.

• Realizar prueba bioquímicas utilizando el método de CRYSTAL.

• Informar si se encuentracomo: presencia de Listeria monocytogenes en 25 gr de muestra analizada.

• Informar si no se encuentra: ausencia de Listeria monocytogenes en 25 gr de muestra analizada.

BBL Crystal

Los paneles BBL CRYSTAL RGP contienen 29 substratos bioquímicos y enzimáticos deshidratados. Para rehidratar se utiliza una suspensión bacteriana en la fluido del inoculo. Las pruebas usadas en el sistema sebasan en degradación y utilización microbiana de substrato específicos detectados por los sistemas indicadores. La hidrólisis enzimática de los substratos Fluorogenicos que conteniendo derivadas del cumarinicos de 4-methylumbelliferone (4MU) o 7-amino-4-methylcoumarin (7-AMC), resulta en un aumentó fluorescencia que se detecta fácilmente a simple vista con una lámpara de luz ultravioleta.11,12,14,15 de luz UV los substrato cromogenico después de sufrir hidrólisis produce cambio de color que puede ser detectado visualmente. Además, hay pruebas que detectan la habilidad de un organismo hidrolizar, degradar, adelgazar o de otra manera utilizan un substrato en los sistemas BBL CRYSTAL. Las reacciones de varios substratos y una explicación breve de los principios empleados en el sistemaestán descritas en la tabla 2 (vea a pg. 8). La posición del panel en dichas tablas indica el reglón y la columna donde el pozo está ubicado (el ejemplo: El 1J se refiere a Row 1 en columna J).

Tabla 2

[pic]

• Dentro del área estéril (es decir, junto al mechero encendido) con el Asa Redonda estéril, tome una colonia bien aislada de la placa o medio de cultivo de PALCAM y...