medisió de la concentración de proteínas y método de Biuret

Introducción
La reacción de Biuret es una reacción coloreada (violeta) debida a la formación de un complejo de Cu+2 en medio alcalino en compuestos que poseen más de un grupo -CO-NH- . Recibeeste nombre por el compuesto de Biuret, cuya estructura y la del complejo coloreado aparece en la figura 1 (ver anexo).
Al tener las proteínas más de un grupo –CO-NH- dan positiva la reacción deBiuret con una intensidad de color que es uniforme para todas las proteínas, ya que depende de un grupo común a todas ellas, y no de las cadenas laterales de los aminoácidos. Es esta la principal ventajade este método, junto con la sencillez de su práctica experimental y el bajo costo de su reactivo. El principal inconveniente de este método es su sensibilidad relativamente baja: es aplicable amuestras con cantidades superiores a los 100 μg.
Debido a las ventajas citadas, el método de Biuret se emplea ampliamente en la determinación clínica de proteínas plasmáticas, y muy espacialmente enanalizadores automáticos. (1)

Objetivos

- Aprender el empleo de una curva patrón para la determinación de la cantidad de moléculas presentes en una muestra, en este caso de proteínas.
-Determinar la concentración de proteínas en una muestra de ovoalbúmina y orina, utilizando el método de Biuret.

Procedimiento experimental.

Para la actividad de laboratorio se rotularon 8 tubos deensayo, a los cuales se les agregaron diferentes soluciones: Tubo 1: 2.0 ml de NaCl ; Tubo 2 : 1.8 ml de NaCl+ 0.2 ml de SAB ; Tubo 3: 1.5 ml de NaCl + 0.5 ml de SAB ; Tubo 4: 1.0 ml de NaCl + 1.0 mlSAB ; Tubo 5 : 0.5 ml NaCl + 1.5 ml SAB ; Tubo 6 : 2.0 ml SAB ; Tubo 7 : (Muestra problema 1) 2.0 ml ovoalbúmina diluida 1:50 ; Tubo 8 : (Muestra problema 2) 2.0 ml de orina diluida 1:10.Posteriormente a cada tubo se le agregó 2.0 ml de reactivo de Biuret, se agitó suavemente y posteriormente transcurridos 10 minutos a temperatura ambiente, se trasvasijó cada una de las muestras en cubetas...