Practica Evo 1parcial


Título de la Práctica:


Metodología.-
Extracción de DNA.

1. Tomar una asada (con un hisopo) de células de epitelio bucal, posteriormente diluir en 500 µL de PBS.
2. Agregar 200 µL de SLC (Solución Lisis Celular.
3. Incubar a 56º C durante 30 minutos.
4. Agregar 100 µL de Acetato de Potasio (CH3COK); Precipitado de Proteínas.
5. Sumergir en hielo durante 5 minutos, ᴓ 10 minutos a 14000 rpm.
6.Pasar 500 µL del Sobrenadante a un tubo eppendorf de 1.5 mL.
7. Agregar 2 volúmenes de Etanol (Abs/1min.).
8. Incubar a -20º C durante 15 min.
9. ᴓ 10 min. a 14000 rpm.
10. Lavar con Etanol al 70% (1 mL).
11. ᴓ 1 min. a 14000 rpm.
12. Dejar secar.
13. Resuspender 50 µL en Agua.

PCR de muestras de DNA extraídas.
Mix RX 1x
Agua 12 µL
Master Mix 5 µL
Oligo 1F 1 µL
Oligo 2R 1 µL
Oligo 3F1 µL
Oligo 4R 1 µL
DNA 4 µL
25 µL


Programa (PCR):

Ciclo 1: 94º C durante 5 min.

Ciclo 2: 94º C durante 1 min.

Ciclo 3: 58º C durante 30 seg.

Ciclo 4: 72 º C durante 1 min.

Ciclo 5: 72º C durante 5 min.



Antecedentes.-
Las interleucinas son proteínas de bajo peso molecular esenciales para la comunicación intercelular. Varios tipos celulares las producen, principalmente el sistemainmune. Tiene función como mediadores solubles y controlan funciones como diferenciación y maduración celular, inflamación y respuesta inmune, reparación tisular, hematopoyesis, apoptosis y muchos otros procesos biológicos.
Entre estas interleucinas, la principal es la IL6, que estimula la producción de la mayoría de las proteínas de fase aguda. Esta interleucina ejerce diferentes accioneshematológicas, inmunológicas, en el hígado y metabólicas; junto con la IL1 el interferón gamma y alfa, se comporta como un importante regulador de la termogénesis corporal y se ha demostrado su papel como pirógeno endógeno. (Suárez L, J. 2007).
La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria sistémica autoinmune caracterizada por una inflamación persistente de las articulaciones. Aunque eltrastorno es de causa desconocida, la autoinmunidad juega un papel primordial en su origen, en su cronicidad y en la progresión de la enfermedad. La enfermedad se asocia con la presencia de auto auto anticuerpos. (Scott, D.L., 2010)
La IL6 juega un papel degenerativo en inflamatorio observado en la AR a través de diversos mecanismos. Una de las principales funciones de patogenia en la AR serelaciona con la capacidad de la IL6 de desencadenar procesos inflamatorios a nivel sistémico, como incrementar la termogénesis y síntesis de proteínas de fase aguda (Castell JV. Et al. 1988).
La IL6 desempeña un papel importante en la AR, ya que se sabe que ésta tiene una cantidad muy alta de funciones proinflamatorias, las cuales tienen gran importancia en la fisiopatología de la AR, por esto es muyfácil comprender que la mayoría de las terapias están dirigidas a bloquear algunas de estas funciones (Maini RN. Et al. 2006). El líquido sinovial en pacientes con AR, se encuentra con altas concentraciones de IL6 y otros compuestos de esa familia de citosinas, lo cual se relaciona directamente con la gravedad de la enfermedad. Conociendo esto, se ha sugerido determinar la IL como un marcador de laactividad de la enfermedad (Garnero, P. et al. 2010).
El tratamiento de AR se constituye principalmente por anti inflamatorios no esteroideos (AINEs) y el metotrexato (MTX) en conjunto con antirreumáticos modificadores de la enfermedad (FAMEs) con corticoides (Gabay, C. 2006).



Resultados.-


Discusión.-

Actualmente existen muchos estudios relacionados con la Interleucina 6 (IL-6), la cualesta implicada en ciertos procesos importantes en el metabolismo humano. Existen diversas enfermedades relacionadas con el polimorfismo -174 G/C de la IL6, entre las cuales están: diabetes, enfermedades cardiovasculares, enfermedades reumáticas como la artritis, enfermedades autoinmunes, entre otras. La IL-6 es una molécula pleiotrópica con acciones proinflamatorias y antinflamatorias (Saavedra,...