Purificacion de proteinas

Purificación de proteínas

Purificación
Proceso que cuenta con varias etapas cuyo objetivo es lograr la concentración diferencial de la proteína o molécula de interés

Condiciones generales aevaluar
• Calidad (% de pureza del producto de acuerdo a mis objetivos) secuenciación, cristalización ensayo de actividad, productos alimenticios médicos • Cantidad técnicas de alta capacidad y debaja capacidad preparativas analíticas • Costos

Pasos a seguir en una purificación
1. Definir un ensayo específico que identifique a la proteína (actividad biológica) (específico, sensible, rápidoy barato) 2. Elegir la fuente (matriz biológica) 3. Extraer la proteína de la fuente (proteínas intraceluares o extracelulares) 4. Estabilización de la molécula 5. Aislamiento y concentración(fraccionamiento) 6. Determinar la pureza y calidad del producto final

1 Actividad Biológica

Cantidad de proteína que produce, por su acción biológica, un determinado cambio.

Este cambio puede ser:• Un efecto biológico (Muerte celular, hemólisis, protección inmunológica) • Variación en la cantidad de una sustancia química (producto de una reacción)

De esta forma podemos definir a la unidad deactividad biológica como :

Una unidad de Actividad Biológica es la cantidad de proteína que produce una determinada cantidad de “efecto” 1. Toxina Una unidad de AB para una toxina es la cantidadde proteína que produce la muerte del 23% de los ratones de tal especie (siguen especificaciones…) 2. Enzima Una unidad de AB para una enzima es la cantidad de proteína que produce 5.98 moles deproducto en 1 minuto en condiciones …(siguen especificaciones…)

2 Elección de la Fuente

Matriz donde se encuentra la proteína de interés
• Concentración • Accesibilidad • Costo • Facilidad de laextracción

3 Extracción de la proteína de la fuente
Lisis osmótica: técnica muy suave. Uso de sn hipotónicas + fuerzas mecánicas. Para bacterias y células vegetales: lisozimas u otras enzimas...