Varios metodos de determinacion de proteinas

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS EN ALIMENTOS CON EL MÉTODO DE BIURET

CONCEPTOS PREVIOS:
 Métodos colorimétricos para la determinación de proteínas.
1.2. Método de Biuret
Se basa en la formación deun complejo coloreado entre el Cu2+ y los
grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico. 1Cu2+ se acompleja con
4 NH. La intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad
deproteínas (enlaces peptídicos) y la reacción es bastante específica, de
manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del método es muy
baja y sólo se recomienda para la cuantificaciónde proteínas en preparados
muy concentrados (por ejemplo en suero).

1.3. Método de Bradford
Se basa en la unión de un colorante, Comassie Blue G-250 (también
Serva Blue) a las proteínas. Elcolorante, en solución ácida, existe en dos
formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para
formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor
que elcolorante libre. Este método es sensible (1-15 µg), simple, rápido, barato
y pocas sustancias interfieren en su determinación. Entre las sustancias que
interfieren están los detergentes y lassoluciones básicas.

1.4. Método de BCA
El ácido bicinconínico, sal sódica, es un compuesto capaz de formar un
complejo púrpura intenso con inones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo
forma la base deun método analítico capaz de monitorizar el ión cuproso
producido en una reacción entre las proteínas con Cu2+ en medio alcalino
(reacción de Biuret). La estabilidad del reactivo y el cromóforoproporciona un
método para la cuantificación de proteínas que es sencillo, rápido, muy
sensible, y que muestra una gran tolerancia a compuestos que afectan a otros
métodos.
OH-
Proteína + Cu2+ →Cu1+
Cu1+ + BCA → complejo púrpura BCA- Cu1+
1.5. Objetivos
Con esta práctica se pretende introducir al alumno en los diferentes
métodos para la cuantificación de proteínas: su fundamento, sus...