Determinación de la concentración de proteínas por método de bradford

1.-Objetivos:
* Usando el método de Bradford trazar la curva de calibración, la cual se puede conocer midiendo la absorbancia de soluciones con concentraciones conocidas de sustrato en estecaso el patrón de Albumina Sérica de Bovino (1mg/ml).
* Determinar la concentración de tres muestras problema, las cuales se determinan mediante la curva de calibración.

2.-Resultadosexperimentales:

Tabla 1: Absorbancia soluciones patrón.

Tubo | Volumen de solución de BSA 1mg/ml (µl) | Absorbancia 1 a 595 nm | Absorbancia 2 a595 nm | Absorbancia promedio a 595 nm |
1 | 0 | 0,308| 0,296 | 0,302 |
2 | 2 | 0,506 | 0,441 | 0,4735 |
3 | 4 | 0,592 | 0,61 | 0,601 |
4 | 6 | 0,508 | 0,5 | 0,504 |
5 | 8 | 0,547 | 0,469 | 0,508 |
6 | 10 | 0,629 | 0,557 | 0,593 |
7 | 20 |0,877 | 0,883 | 0,88 |
8 | 30 | 0,997 | 0,989 | 0,993 |
9 | 40 | 0,978 | 0,978 | 0,978 |
10 | 50 | 1,055 | 1,041 | 1,048 |

Tabla 2: Absorbancia muestras problema.
Muestras problemas |Volumen de solución de BSA (µl) | Volumen de agua destilada (µl) | Volumen de Bradford (µl) | Absorbancia a 595 nm | [BSA] (µg/µl) |
1 | 8 | 42 | 450 | 0,516 | 0,775 |
2 | 10 | 40 | 450 | 0,591 | 0,995|
3 | 8 | 42 | 450 | 0,588 | 1,225 |

Gráfico 1: Curva de calibración realizada a partir de los datos de la tabla 1.

Gráfico 2: Curva de calibración ajustada para calcular
concentraciones demuestras problema.

3.- Cálculos y análisis de resultados:

A partir del gráfico 2 se calcula la ecuación de la recta la cual es y = 0,020x + 0,392 en donde y es la absorbancia, la cual se mideen un espectrofotómetro, y x es la masa en µg. Reemplazando los datos de la tabla 2 en la ecuación de la recta se obtiene la masa de la muestra problema:
Para la muestra 1 se tiene:0,516=0,020*x+0,392
x1=6,200 μg de BSA
Análogamente para la muestra 2 y 3 se tiene:
x2=9,950 μg de BSA
x3=9,800 μg de BSA

Para obtener la concentración de las muestras se tiene:
BSA= masa (μg) de...