Determinación De Azúcares Reductores Por La Técnica De Miller (Dns)

DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES POR LA TÉCNICA DE MILLER (DNS)

Resumen
En la presente práctica se llevará a cabo la determinación de azúcares reductores. La cantidad de azúcares reductores se determinará colorimétricamente aplicando el método del ácido dinitrosalicílico (DNS) a una gama de soluciones patrón de glucosa, a objeto de obtener la correspondiente curva de calibrado.
Palabrasclave: carbohidratos, azucares reductores, método colorimétrico.
Abreviaturas empleadas: DNS, ácido dinitrosalicílico.
1. Introducción y objetivo

Los carbohidratos son moléculas formadas por carbono, hidrogeno y oxigeno. Todos los carbohidratos son azucares pequeños, solubles en agua (glucosa y fructosa, por ejemplo) o bien cadenas, como el almidón y la celulosa, que se elaboran enlazandosubunidades de azúcar.
En la naturaleza, los carbohidratos se presentan como monosacáridos (azucares simples), oligosacáridos (contienen de dos a diez unidades monosacáridas) y polisacáridos (glúcidos poliméricos mas grandes). Los monosacáridos se clasifican en aldosas si tienen grupo aldehído y cetosas si tienen un grupo cetona. Todos los monosacáridos, aldosas o cetosas y la mayoría de losdisacáridos son azucares reductores (excepto la sacarosa) porque uno de sus dos carbonos anoméricos no está formando enlace glucosídico.
Las pruebas de Fehling y de Benedict, por ejemplo, se basan en la capacidad de los azucares reductores de reducir los iones cúpricos (Cu2+) y aportan un ensayo sencillo para reconocer azucares que pueden existir como aldehído o cetona libre. Los azucares quereaccionan se llaman azucares reductores, que pueden unirse de forma inespecífica a otras moléculas; los que no lo hacen, azucares no reductores.
El método DNS es una técnica colorimétrica que emplea 3,5-ácido dinitrosalicílico para la hidrólisis de polisacáridos presentes en una muestra, seguido de la determinación espectrofotométrica a 540nm de los azúcares reductores. Esta técnica sirve paracuantificar los azucares reductores producidos durante una fermentación o para cuantificar los productos de una reacción enzimática.

Objetivo:
Construcción de una curva patrón para calcular el coeficiente de correlación mediante el método DNS.
2. Material

3.1. Material
*
* Tubo de ensaye con rosca (25)
* Gradilla para tubos (1)
* Probeta de 100mL (1)
* Vasos depp de 100mL (2)
* Pipetas de 1mL (2)
* Pipetas de 2mL (2)
* Pipetas de 5mL (2)
* Pipetas de 10mL (2)
* Matraz aforado de 100mL (1)
* Matraz aforado de 250mL (1)
* Baño María (1)
* Piseta con agua destilada (1)
* Agitador magnético (1)
* Termómetro (1)
* Frasco ámbar (1)
* Celdas para espectrofotómetro (2)
* Papel seda
3.2.3.3. Equipo
*
* Vórtex
* Parrilla de agitación y calentamiento
* Espectrofotómetro
3.4.
3.5. Reactivos
*
* Acido 3,5-dinitrosalicílico (DNS)
* Hidróxido de sodio anhidro (NaOH)
* Fenol (C6H6O)
* Sulfito de sodio anhidro (Na2SO4)
* Glucosa (C6H12O6)

3. Método

4.6. Reactivo DNS
Disolver 2.5g de DNS, 2.5g de NaOH, 0.125g deNa2SO4 y 0.5g de C6H6O en 200mL de agua destilada. Aforar a 250mL con agua destilada. Colocar la solución en el frasco ámbar y etiquetarla.
4.7. Solución patrón de glucosa (1.0g/L)
Disolver 0.1g de glucosa en 90mL de agua destilada, agitar hasta disolver y aforar a 100mL.
4.8. Curva patrón
A partir de una solución de glucosa y por dilución con agua destilada, preparar una gama desoluciones de glucosa de distinta concentración (por duplicado), como se indica en el anexo (An1; Tabla 1).
A cada uno de los tubos, adicionar 1mL del reactivo DNS y agitar con el Vórtex. Poner en baño María en ebullición durante 5 minutos, enfriar, agregar 8mL de agua destilada y determinar la absorbancia a 575nm, utilizando como blanco el tubo 1.

4. Resultados

En el anexo (An2) se...